Verwendung der PCR-Diagnostik

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Die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) in der Molekularbiologie ist eine experimentelle Methode zum Nachweis von Viren. Damit können Sie die Konzentration bestimmter Nukleinsäurefragmente (DNA) in Proben von biologischem Material deutlich erhöhen, wodurch sie bestimmt (erkannt) und gezählt werden können.

Die Analyse wird wie folgt durchgeführt. Genetisches Material (eine Blutprobe), das möglicherweise das gewünschte Gen enthalten kann, wird in die Röhre eingeführt. Es werden auch Primer platziert - chemisch synthetisierte Segmente einer kleinen Länge des gewünschten Gens.

Dem Gefäß wird auch DNA- oder RNA-Polymerase zugesetzt, die in der Lage ist, eine Nukleinsäurekette anzuordnen, die völlig identisch mit dem Original ist. Die resultierende Zusammensetzung wird injiziert und ein Satz von vier freien Nukleotiden - ein spezielles Baumaterial für RNA oder DNA, von denen eines radioaktive Phosphorpartikel enthält.

Die resultierende Mischung wird auf 95–96 ° C erhitzt, weshalb zwei normalerweise miteinander verflochtene DNA-Helices gewebt werden. Dann wird der Wirkstoff gekühlt, zu welchem ​​Zeitpunkt die Primer selbst an die gewünschte Region des viralen Genoms anhaften, wodurch verhindert wird, dass RNA (oder DNA) erneut eine Doppelhelix bildet.

Beim Abkühlen sucht die Polymerase nach einer freien Nukleotidkette. Für das Funktionieren dieses Enzyms wird eine einzelne Nukleotidkette benötigt. Da die Polymerase entlang der DNA-Kette rutscht (wie ein Ring an einem Seil), kann sie nicht an einer Doppelhelix arbeiten.

Danach wird ein wiederholter Erhitzungszyklus ausgeführt, aufgrund dessen Ketten von Nukleotiden getrennt werden. Bei jedem dieser PCR-Zyklen steigt die Menge des gewünschten Hepatitis-Gens in der Probe exponentiell an, und der Rest des genetischen Materials wird linear erzeugt (wächst).

Nach der Reinigung der Lösung von Nukleotidresten und der Trennung durch Elektrophorese von DNA-Ketten durch den Molekulargewichtsparameter kann leicht festgestellt werden, ob sich in der untersuchten Probe ein gewünschtes Gen befindet oder nicht.

Vorteile der PCR

Durch Labortests mittels PCR können noch mehr Informationen erhalten werden als das Vorhandensein der Virus-RNA. Durch die Bestimmung des Parameters der radioaktiven Strahlung kann festgestellt werden, wie viel genetisches Material ursprünglich in der untersuchten Probe enthalten war. Bei Hepatitis den Indikator für die Viruslast bestimmen.

Ein weiterer Vorteil dieser Methode ist die sehr hohe Empfindlichkeit der CR-Reaktion. Es ist viel höher als bei den klassischen Methoden zum Erkennen von Viren. Idealerweise reicht für die Identifizierung des gewünschten Gens für die PCR nur ein Virus in der Probe aus.

Darüber hinaus ist die PCR völlig spezifisch. Seine Primer sind so konzipiert, dass sie vollständig den eindeutigen Regionen der gewünschten Gene entsprechen, die keine andere Sequenz hat. Da Fingerabdrücke einzigartig sind, gibt es in jedem Gen einzigartige Nukleotidsequenzen.

Qualitative Analyse der PCR

Durch qualitative Analyse können Sie nur das Vorhandensein eines Virus im Blut erkennen. Dieser Test sollte für alle Patienten durchgeführt werden, bei denen Antikörper gegen Hepatitis C im Blut gefunden wurden, und kann nur einen von zwei Werten ergeben: „erkannt“ oder „nicht erkannt“. Bei einem gesunden Menschen sollte die Norm (Referenzwert) „nicht erkannt“ werden.

Es gibt eine spezielle Interpretation solcher Ergebnisse der qualitativen Forschung:

  • Das Ergebnis wird "erkannt". Dies bedeutet, dass in der analysierten Probe des biologischen Materials ein für das Hepatitis-C-Virus spezifisches RNA-Fragment gefunden wurde, was bedeutet, dass der Patient mit dem Hepatitis-C-Virus infiziert ist. Wenn das Ergebnis einer qualitativ hochwertigen PCR „entdeckt“ wird, bedeutet dies, dass sich das Virus vermehrt und zu diesem Zeitpunkt infiziert es neue Leberzellen im Körper.
  • Das Ergebnis wird "nicht erkannt". Ein solches Urteil zeigt, dass in der analysierten Probe biologischen Materials, das in diesem Labor gewonnen wurde, kein RNA-Fragment gefunden wurde, das für das Hepatitis-C-Virus spezifisch ist. Alternativ lag die Konzentration der RNA der Erregerinfektion in dieser Probe unter der Empfindlichkeitsgrenze des Tests.

In der akuten Phase der RNA des Hepatitis-C-Virus können solche qualitativen Studien mit der PCR-Methode bereits nach 1 bis 2 Wochen unmittelbar nach der Infektion des Körpers, dh lange vor dem Auftreten von Antikörpern gegen Hepatitis selbst, nachgewiesen werden.

Ungenaue Testergebnisse dieser Studie können erhalten werden durch:

  • kontaminiertes Biomaterial;
  • das Vorhandensein von Heparin im Blut des Patienten;
  • das Vorhandensein von chemischen Substanzen oder Proteinsubstanzen (Inhibitoren) in der Probe, die die verschiedenen Komponenten der PCR beeinflussen.

Um eine qualitative Analyse der PCR durchzuführen, ist keine besondere Vorbereitung des Patienten für die Studie erforderlich. Venöses Blut wird als Material verwendet.

Auswertung der Ergebnisse

Qualitativ hochwertige PCR-Tests haben eine gewisse Empfindlichkeit und können je nach Genauigkeit der Forschung und Ausstattung des Labors von 10 bis 500 IE / ml variieren.

Das bedeutet, wenn das Virus in der Blutprobe in einer sehr geringen Konzentration vorliegt (unter dem Schwellenwert der Empfindlichkeit dieses Labors), dann kann das Ergebnis bei einem Patientenpatienten als "nicht erkannt" bestimmt werden. Aus diesem Grund ist es bei einer qualitativen Analyse der PCR mit einem niedrigen Virämie-Level (niedrige Virenkonzentration) beispielsweise für Patienten, die sich einer antiviralen Therapie unterziehen, sehr wichtig, die Sensitivitätsschwelle dieses Diagnosesystems zu kennen.

Varianten von Diagnosesystemen

Zur Kontrolle der virologischen Reaktion wird empfohlen, zur antiviralen Behandlung Diagnosesysteme mit einer Empfindlichkeitsschwelle von mindestens 50 IE / ml zu verwenden. Diese Kriterien werden zum Beispiel mit Cobas Ampicolor HCV-Test-Analysegeräten (mit einer Genauigkeit von 50 IE / ml) sowie mit RealBest-HCV-RNA (mit einer Empfindlichkeit von 15 IE / ml) erfüllt.

Nach den Empfehlungen der WHO ist es zur Feststellung einer endgültigen Diagnose von Hepatitis C erforderlich, nur auf der Grundlage des dreifachen Nachweises von C-Virus-RNA in den Serumproben eines Patienten zu stützen, wenn keine anderen Hepatitis-Marker vorhanden sind.

Neben den PCR-Methoden wird auch ein TMA-Assay (transkriptionelle Amplifikationsmethode) zum Nachweis von HCV-RNA bei Patienten eingesetzt. Es hat die beste Empfindlichkeitsschwelle (5–10 IE / ml), aber in unserem Land ist eine solche Testmethode noch nicht sehr verbreitet.

Umfang der nachweisbaren Virusmodifikationen

Durch eine solche qualitative Bestimmung der Anwesenheit von RNA des Hepatitis-C-Virus im Serum können mehrere Genotypen dieses Virus bestimmt werden. Derzeit kennt die Wissenschaft mehr als sechs Genotypen dieses Virus sowie etwa 10 Subtypen dieser Krankheit.

In unserem Land häufen sich Viren 1, 2, 3 Genotypen. Laboratorien können die folgenden Genotypen nachweisen: 1a und 1b, 2a, 2b und 2c sowie 3, 4, 5a und 6, unabhängig von den Subtypen. Für alle Virusmodifikationen beträgt die Erkennungsspezifität 100%.

PCR Quantitative Analyse

Mit Hilfe eines quantitativen PCR-Tests wird die Konzentration des Hepatitisvirus in Blutproben (Viruslast) bestimmt. Mit diesem Test auf Virämie (Viruskonzentration) können Sie die Anzahl der Einheiten eines bestimmten genetischen Materials (der meisten viralen RNA) bestimmen, die in einer bestimmten Menge nachgewiesen wird. In diesem Fall bestimmen Sie seine Konzentration in 1 ml, was 1 cu entspricht. sehen

Quantitative Analyseparameter werden in Zahlen ausgedrückt. Zu diesem Zweck werden internationale Einheiten (IE) pro Milliliter (ml), die als IE / ml bezeichnet werden, als Maßeinheiten verwendet. In einigen Laboratorien kann nun die Virusmenge in anderen Einheiten bestimmt werden: Die Anzahl der Kopien pro ml wird in Kopien / ml angegeben.

  • Termine: Bei Hepatitis C erfolgt eine solche quantitative Analyse der PCR unmittelbar vor Therapiebeginn. Dann in der 1., 4., 12. und 24. Woche. Die Bewertung in der 12. Woche ist indikativ und ermöglicht die Bestimmung der Wirksamkeit der Therapie.
  • Vorbereitung für die Analyse. Um eine quantitative PCR-Analyse durchzuführen, ist keine besondere Vorbereitung des Patienten für die Studie erforderlich. Eine halbe Stunde vor der Probenahme darf nicht geraucht werden. Venöses Blut wird als Labormaterial verwendet.

Auswertung der Ergebnisse

Für verschiedene Labortestsysteme gibt es für diesen Indikator unterschiedliche Umrechnungsfaktoren in IE / ml. Im Durchschnitt nehmen sie einen Umrechnungsparameter an, bei dem 4 Kopien / ml = 1 IE / ml sind. Wenn das Labor beispielsweise das Ergebnis der PCR-Analyse mit 2,4 * 10 6 Kopien / ml liefert, sollte dieser Parameter in 4 unterteilt werden, und wir erhalten 6 * 10 5 IE / ml.

Eine Belastung von 800.000 IE / ml wird als hoch angesehen, was ungefähr 3.000.000 Kopien / ml entspricht. Niedrige Virämie entspricht laut einigen Autoren den Parametern der quantitativen PCR unter 400.000 IE / ml.

Als Ergebnis des quantitativen Tests können die Endergebnisse nicht in Form eines digitalen Werts geliefert werden, sondern: „unterhalb des Messbereichs“ oder „nicht erfasst“.

  • Bewertung: "unterhalb des Messbereichs." Dies deutet darauf hin, dass der quantitative Test keine Hepatitis-C-Virus-RNA nachweisen konnte, das Virus selbst jedoch in sehr geringen Konzentrationen im Körper vorhanden ist. Dies wird durch einen zusätzlichen qualitativen Test belegt, der das Vorhandensein des Virus bestätigt.
  • Bewertung: nicht erkannt Dieses Ergebnis zeigt an, dass der quantitative Test in der Probe der Virus-RNA nicht gefunden wurde.

Der Parameter der Viruslast bestimmt vor allem den Infektionsgrad der Erkrankung, den Grad der "Infektiosität" des Patienten. Je höher die Viruskonzentration des Patienten ist, desto größer ist die Wahrscheinlichkeit, dass er an andere Personen weitergegeben wird. Zum Beispiel während des Geschlechtsverkehrs mit einer kranken Person oder vertikal. Dieser quantitative Indikator hilft auch, die Wirksamkeit der Behandlung des Patienten zu bestimmen.

Die Durchführung einer quantitativen Analyse der CCP ist wichtig für die antivirale Therapie, die Beurteilung des Erfolgs und die Planung der Dauer des Kurses. Bei einer schnellen Reaktion des Körpers auf die Behandlung und einem geringen Grad an Virämie kann daher die Therapiedauer verkürzt werden.

Wenn der quantitative PCR-Parameter langsam reduziert wird, sollte die antivirale Therapie verlängert oder modifiziert werden. Wenn die Viruslast niedrig ist, ist dies ein günstiger Faktor für die Therapie, aber wenn sie erhöht ist, ist die verwendete Methode unwirksam und die Medikamente oder Methoden für ihre Verwendung sollten geändert werden.

Nr. 321СВ, Hepatitis-C-Virus, Definition der RNA-Qualität. (HCV-RNA, qualitativ) im Serum

Bestimmung der RNA des Hepatitis-C-Virus (HCV) in Serum durch Polymerase-Kettenreaktion (PCR) mit Nachweis im "Echtzeit" -Modus.

Das nachgewiesene Fragment stellt eine spezifische Region der Hepatitis-C-Virus-RNA dar. Nachgewiesene Genotypen: 1a, 1b, 2a, 2b, 2c, 2i, 3, 4, 5a, 6, unabhängig vom Subtyp. Die Spezifität der Definition beträgt 100%. Die Nachweisempfindlichkeit beträgt 60 IE / ml.

  • Klinische Anzeichen einer Hepatitis.
  • Prophylaktische Screening-Studien (Hepatitis-C-Virus-RNA ist der früheste Marker für eine akute Infektion).
  • Umfragen bei Ansprechpartnern.
  • Diagnose einer Hepatitis mit gemischter Ätiologie - Identifizierung des führenden Virus.
  • Identifizierung des Stadiums der aktiven Replikation des Virus in einem chronischen Zustand.
  • Überwachung der Wirksamkeit der Therapie.
  • Leberzirrhose.

Die Interpretation von Forschungsergebnissen enthält Informationen für den behandelnden Arzt und ist keine Diagnose. Die Informationen in diesem Abschnitt können nicht zur Selbstdiagnose und Selbstbehandlung verwendet werden. Eine genaue Diagnose wird vom Arzt gestellt, wobei sowohl die Ergebnisse dieser Untersuchung als auch die erforderlichen Informationen aus anderen Quellen verwendet werden: Anamnese, Ergebnisse anderer Untersuchungen usw.

Diagnose mit PCR für Hepatitis C

Nicht jeder weiß, warum sie die PCR-Diagnosemethode für Hepatitis C verwenden. Eine der am weitesten verbreiteten Krankheitsgruppen sind Infektionskrankheiten im Magen-Darm-Trakt. Am häufigsten leiden der Magen (Geschwüre), der Darm (Kolitis, Enteritis) und die Leber (Hepatitis).

Unter allen oben aufgeführten Organen wird die Leber am stärksten belastet. Im Körper ist die Rolle der Leber extrem wichtig:

  1. Praktisch alle Stoffwechselreaktionen finden in der Leber statt (hier werden alle Arten lebenswichtiger Komponenten gebildet, die dem Körper die volle Funktion ermöglichen).
  2. Die Leber ist das Hauptentgiftungsorgan. Mit seiner Hilfe (insbesondere durch Galle) werden viele Substrate entfernt, die zu Vergiftungen führen können und schwerwiegende Folgen haben.

Leider überwachen viele Menschen ihre Gesundheit nicht, weil die Leber darunter leidet. In der Regel entwickeln sich Hepatitis verschiedener Genese (viral, toxisch).

Definition von Hepatitis

Virushepatitis nimmt einen wichtigen Platz unter Lebererkrankungen ein. Die Schwere des Krankheitsverlaufs, die Komplexität der Behandlung rangieren bei der Pathologie der anderen Natur dieses Organs an erster Stelle.

Jede Hepatitis ist in akute und chronische unterteilt. Hepatitis A und B werden als akut eingestuft, bei chronischer Hepatitis steht C an erster Stelle.

Diese Krankheit wird durch das Hepatitis-C-Virus verursacht. Ein charakteristisches Merkmal ist, dass die Krankheit ohne klinische Manifestationen lange anhalten kann.

Es wird hauptsächlich durch das Blut übertragen. Mit dem Blutstrom dringt das Virus in die Leber ein, wo es sich in seinen Zellen vermehrt. Durch die Anhäufung von Virionen kommt es zur Zerstörung des infizierten Hepatozyten. Als Reaktion beginnen Antikörper zu produzieren, die die Überreste von Hepatozyten angreifen. Aus diesem Grund entwickelt sich im Laufe der Zeit ein Pool gegen Leberzellen, der den Krankheitsverlauf verschlimmert.

Aufgrund der Tatsache, dass die Krankheit asymptomatisch oder asymptomatisch ist und klinische Anzeichen nur mit erheblichen Zellschäden auftreten, erfordert diese Krankheit die Schaffung von Diagnosemethoden, um deren Vorhandensein zu erkennen und geeignete Maßnahmen zu ergreifen.

Diagnose von Hepatitis C: qualitative und quantitative Analysen

Derzeit für die Diagnose von Hepatitis C mit Methoden wie Leberbiopsie, Immunogramm.

Damit können Sie das Vorhandensein infizierter Hepatozyten (einer Leberbiopsieprobe) oder spezifischer Antikörper gegen betroffene Zellen (Immunogramm) direkt feststellen. Es gibt jedoch eine Methode, mit der Sie das Vorhandensein des Virus selbst zuverlässig feststellen können. Diese PCR ist eine Polymerasekettenreaktion.

Das Wesentliche dieser Methode liegt in der Tatsache, dass unter bestimmten Bedingungen die Produktion von RNA-Ketten erfolgt. Dies ist darauf zurückzuführen, dass im Blut oder in der fraglichen Biopsie Fragmente eines Viruspartikels vorhanden sind. Wenn sie mit einigen Molekülen im Medium verbunden werden, erfolgt die Synthese von Ketten, die zu viraler RNA komplementär sind. Bei der anschließenden Analyse und dem Vergleich mit der bekannten Nukleotidsequenz des Hepatitis-C-Virus kann festgestellt werden, ob das Virus im Körper vorhanden ist und ob ein Leberschaden vorliegt.

Die PCR wird nach dem Nachweis spezifischer Antikörper im Blut gegen das Hepatitis-Virus durchgeführt. Nach dem Test wird das Ergebnis erstellt - RNA wird "detektiert" oder "nicht detektiert". Gelegentlich sagt er "nicht genug Material" - in diesem Fall muss die Analyse auf Hepatitis C wiederholt werden.

Wenn die Anzahl der Viruspartikel unter der erforderlichen Mindestmenge liegt, können wir sagen, dass es keine Hepatitis gibt und minimale Mengen an genetischem Material aufgrund von Nachahmung des genetischen Materials oder einiger Nukleotidsequenzen, die mit dem Virus zusammenfallen könnten, „verwirrt“ werden könnten.

  1. Bei der PCR kann ein negatives Ergebnis beobachtet werden, wenn tatsächlich Viruspartikel im Blut vorhanden sind, die jedoch so gering sind (Infektion trat kürzlich auf oder der Analyse war eine langfristige und intensive antivirale Therapie vorangegangen), so dass das Testsystem ihre Konzentration einfach nicht richtig bestimmen konnte. RNA - "nicht erkannt".
  2. Wenn die PCR ein positives Ergebnis hat, befinden sich so viele Viruspartikel im Blut, dass deren Anzahl die untere Empfindlichkeitsschwelle des Testsystems überschreitet. In diesem Fall besteht ein hohes Risiko, einen infektiösen Prozess zu entwickeln (oder er ist bereits in einem fortgeschrittenen Stadium vorhanden). In der Regel ist eine hohe Virusmenge bereits ein Hinweis auf die Behandlung und anschließende Lebertransplantation.

Manchmal kann ein Test falsch positiv oder falsch negativ werden.

Ein falsch negatives PCR-Ergebnis von Hepatitis wird beobachtet, wenn sich im Reaktionsmedium einige Komponenten befinden, die die Produktion von Kopien des Viruspartikels hemmen. Aus diesem Grund ist es nicht möglich, ein genaues Bild des Blutzustands zu erhalten, das zum Durchtritt des Virus und zum Fortschreiten der Krankheit beiträgt. Die Anwesenheit von Heparin im Blut kann auch die Reaktion beeinflussen (durch Verringerung der relativen Viskosität des Blutes). Eine falsche Interpretation der Analyse ist auch dann möglich, wenn die Transport- und Lagerungsbedingungen des untersuchten Materials nicht erfüllt wurden.

Falsch positive Ergebnisse, wenn Hepatitis C diagnostiziert wird, erfolgt die PCR meistens, wenn das Röhrchen oder die Arbeitsumgebung kontaminiert ist. Darüber hinaus können positive Ergebnisse in Gegenwart anderer Gruppen von Hepatitisviren beobachtet werden (aufgrund von Kreuzreaktionen).

Qualitative Analyse der PCR zum Nachweis von Hepatitis C

Das Vorhandensein einer großen Anzahl von Kryoglobulinen im Blut beeinflusst auch direkt die Durchführung der PCR. Aus diesem Grund ist es unerlässlich, vor dem Hepatitis-C-Test die Konzentration im Blut zu bestimmen, um die Verzerrung des Ergebnisses im Voraus zu erkennen und zu verhindern.

Nach diesen Tests wird klar, ob sich im Blut Viruspartikel befinden. Bei der Bestimmung wird empfohlen, sofort mit einer antiviralen Therapie zu beginnen, um das Fortschreiten des Prozesses zu verlangsamen. Im Gegensatz zu Hepatitis B gibt es keine vollständige Heilung für Hepatitis C; Die Krankheit geht nur in das latente Stadium über und beginnt langsamer zu verlaufen. Leberschäden sind unvermeidlich. In der letzten Phase des Prozesses, wenn die Leber ihre Funktion nicht mehr bewältigen kann, muss sie möglicherweise transplantiert werden.

Die Behandlung wird hauptsächlich mit zwei Medikamenten durchgeführt - Interferon und Ribavirin.

Ihre Wirksamkeit bei der Verlangsamung des Überlebens von Hepatozyten hat sich gezeigt. Auf dem Weg ist eine Infusionstherapie notwendig, um die Arbeit der Leber zu erleichtern.

Alle Patienten, bei denen eine Zunahme der Anzahl der Viruspartikel im Blut beobachtet wurde, werden notwendigerweise bei einem Hepatologen registriert. Mehrmals im Jahr wird empfohlen, sich einer präventiven Untersuchung zu unterziehen, um den Fortschritt des Prozesses und die rechtzeitige Erkennung von Indikationen für eine Transplantation zu bestimmen. Darüber hinaus ist es möglich, Hepatoprotektoren zu verwenden, obwohl die Meinungen von Ärzten etwas unterschiedlich sind. Einige glauben, dass diese Medikamente es Ihnen ermöglichen, den Prozess zu unterbrechen und die noch nicht betroffenen Hepatozyten zu schützen; Andere sind überzeugt, dass es keinen Sinn macht, sie einzunehmen, und eine intensive antivirale Therapie sollte durchgeführt werden.

Somit gehört Hepatitis C zu den Krankheiten, deren Feststellung einige Schwierigkeiten bereitet. Die Verbesserung der Diagnosemethoden sowie zeitnahe vorbeugende Untersuchungen werden die Inzidenz dieser Erkrankung reduzieren. Wichtig ist die Prävention dieser Krankheit. Man sollte vorsichtig den Kontakt mit Blut vermeiden, die Einnahme von Medikamenten verweigern, nur dann wird diese Krankheit ausgerottet. Die Hauptsache bei Prävention und Behandlung ist die bewusste Einstellung des Patienten zu seiner Gesundheit.

Hepatitis-PCR-Analyse

PCR für Hepatitis C

  1. Hepatitis C-RNA ("PCR qualitative") - Der Nachweis im Bluttest ist ein Hinweis auf akute oder chronische Hepatitis C. Sie wird ab der 2. Infektionswoche bestimmt, bevor Anti-HCV auftritt, mit der Sie die Erkrankung im Frühstadium diagnostizieren können. RNA wird bei Patienten mit akuter Hepatitisklinik und bei Patienten mit positivem Hepatitisergebnis bestimmt.
  2. Hepatitis-C-RNA ("PCR quantitativ") - Die Viruslast ist einer der Indikatoren für die Wirksamkeit der antiviralen Therapie und ihrer Bewertung (durch die Änderung des Niveaus vom Ausgangswert). Die quantitative Charakterisierung des Hepatitis-C-RNA-Gehalts ist wichtig für die Beurteilung der Wirksamkeit einer antiviralen Therapie und hat eine prognostische Bedeutung für die Bestimmung der Chronizität. Patienten mit einer hohen Viruslast (hohe RNA-Menge) vor der Behandlung sprechen weniger gut auf die Behandlung an.
  3. Hepatitis-C-RNA (Genotyp 1, 2, 3) - Die Art der Behandlungstaktik und ihre Wirksamkeit hängen vom Typ ab. Die durch das Genotyp-1-Virus verursachte Krankheit ist hinsichtlich der Vorhersage der Wirksamkeit der Therapie am ungünstigsten. Nach aktuellen Empfehlungen sollte ein Bluttest für die Genotypisierung von Hepatitis C für Patienten vor Beginn der antiviralen Therapie durchgeführt werden.
  4. Hepatitis-C-RNA (erweiterte Genotypisierung 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5, 6) - 1a, 1b, 2a, 2c, 2k, 3a-Subtypen zirkulieren in Russland. Die Hepatitis C, verursacht durch die Viren des Genotyps 1 und 4, ist für die Prognose am ungünstigsten.
  5. Ultrasensitive Hepatitis-C-PCR (qualitative Methode) - Die Analyse wird zur Diagnose der Erkrankung im Frühstadium der Infektion verwendet. Sie ist optimal für die Untersuchung von Spenderblut und die Bewertung der Reaktion auf eine antivirale Behandlung. Diese Studie wird auch ohne Nachweis von Antikörpern gegen das Hepatitis-C-Virus für Patienten mit Lebererkrankungen nicht näher bezeichneter Ursache, erworbener Immunschwäche oder immunsuppressiver Therapie empfohlen.
  6. Die hochempfindliche Hepatitis-C-PCR (quantitative Methode) ist ein einzigartiger Assay mit hoher Empfindlichkeit (10 IE / ml) zur quantitativen Bestimmung der Hepatitis-C-Virus-RNA. Die Studie dient zur Überwachung der Wirksamkeit der Therapie.

PCR für Hepatitis B

  1. Die Hepatitis-B-DNA (qualitative Analyse) ist ein Indikator für die Vermehrung des Hepatitis-B-Virus und erscheint durchschnittlich im ersten Monat nach der Infektion im Blut. In einigen Fällen ist der einzige Marker eine latente HBV-Infektion. Die Bestimmung der DNA eines Virus ermöglicht die Diagnose einer Hepatitis B, die durch mutierte Stämme verursacht wird, die keine anderen Infektionsmarker aufdeckt.
  2. Hepatitis-B-DNA (quantitative Analyse) - Die DNA-Konzentration (Viruslast) ist einer der Tests, um das Stadium der chronischen Hepatitis B und das Kriterium der Wirksamkeit einer antiviralen Therapie zu bestimmen. Die Analyse wird vor und während des Behandlungsprozesses durchgeführt.
  3. Genotypisierung von Hepatitis B - Erkrankungen, die durch unterschiedliche Genotypen des Virus verursacht werden, können sich im klinischen Verlauf und im Ergebnis unterscheiden. Hepatitis B, die durch ein Genotyp-C-Virus verursacht wird, neigt eher zu einem chronischen Verlauf und hat ein hohes Risiko der Umwandlung in Leberzirrhose oder ein hepatozelluläres Karzinom. Patienten, die mit dem Genotyp-A-Virus infiziert sind, sprechen besser auf die Behandlung an.
  4. Ultrasensitive DNA-PCR für Hepatitis B (qualitative Methode) - Sie werden zur Früherkennung der Krankheit eingereicht. Sehr informativ bei der Untersuchung von Blutspendern. Es kann verwendet werden, um die spontane oder behandlungsbedingte Ausscheidung des Virus aus dem menschlichen Körper zu bestätigen.
  5. Ultraschallsensitive PCR für Hepatitis C (quantitative Methode) - Diagnose von Hepatitis-B-Virus-DNA in quantitativer Hinsicht. Die Analyse dient zur Beurteilung der Wirksamkeit der Therapie.
  6. Bestimmung der Mutationsresistenz gegen antivirale Medikamente Lamivudin, Telbivudin, Entecavir, Adefovir, Tenofovir (zusammen mit der Analyse der "DNA von Hepatitis B quantitativ"). Vor Beginn einer antiviralen Therapie und während der Einnahme von Medikamenten muss die Analyse an Patienten mit chronischer Hepatitis B abgegeben werden. Das Ergebnis enthält Informationen über das Vorhandensein einer Resistenz des Hepatitis-B-Virus gegen antivirale Medikamente:
    • R - Virus resistent gegen antivirale Medikamente (Mutationen der Resistenz gegen dieses Medikament werden gefunden);
    • S-Hepatitis-B-Virus ist empfindlich gegen das Medikament (Normalwert, Resistenzmutationen werden nicht erkannt);
    • I - der Erreger der Infektion kann Resistenz gegen dieses Medikament entwickeln.

PCR-Studie für Hepatitis C: Typen, Indikationen, Transkription

Die Virushepatitis C ist eine schwere Erkrankung, die mit einer Schädigung der Leber auftritt. Bei achtzig Prozent der Patienten wird es chronisch. Das Virus vermehrt sich in den Leberzellen - den Hepatozyten - und verursacht deren Tod. Totes Gewebe wird durch Bindegewebsherde ersetzt, es entwickelt sich Fibrose.

Wenn sich die Fibrose entwickelt, kann die Leber ihre Funktionen nicht mehr erfüllen, die Leberzirrhose beginnt, was aufgrund ihrer Komplikationen gefährlich ist: erhöhter Druck im Pfortadungssystem, gastrointestinale Blutungen, beeinträchtigte Blutgerinnung, psychische Veränderungen aufgrund von Schädigungen der Gehirnkerne.

Die Ursache der Erkrankung ist die Infektion mit einem Virus aus der Flaviviridae-Familie, das zum Typ der RNA-Viren gehört. Dies bedeutet, dass das genetische Material, mit dem die Proteine ​​des Erregers synthetisiert werden, im Ribonukleinsäuremolekül kodiert wird. Die Infektion erfolgt durch Blut, sexuell und von einer schwangeren Frau zum Fötus. Leider kann zwischen der Infektion und dem Beginn der Antikörperproduktion eine ausreichend lange Zeit vergehen - von zwei Wochen bis zu sechs Monaten. Dies erlaubt nicht, die Infektion durch die Methode des Immunoassays zu bestimmen und die Behandlung in einem frühen Stadium zu beginnen.

Was ist PCR-Analyse?

PCR ist eine Methode der Molekularanalyse, mit der das Erbgut des Erregers bereits in der ersten Woche nach der Infektion mittels Polymerase-Kettenreaktion nachgewiesen werden kann. Die Studie weist eine hohe Spezifität und Genauigkeit auf und ermöglicht nicht nur die Bestimmung des Vorhandenseins oder Fehlens des Virus, sondern auch dessen Konzentration und Genotyp.

Für die Studie wird das Blut eines Patienten entnommen, in dem sich möglicherweise die Virus-RNA befindet. Primer werden zu den blutartisch synthetisierten Regionen des gewünschten Gens von geringer Länge hinzugefügt, und RNA-Polymerase ist ein spezielles Enzym, das wiederholt die Menge an genetischem Material des Erregers erhöht. Mit einer speziellen Vorrichtung werden mehrere Heiz- und Kühlungszyklen durchgeführt. Anschließend wird das Material analysiert und mit den bekannten Genen des Virus verglichen, woraus eine Schlussfolgerung über das Vorhandensein oder Fehlen einer Infektion gezogen wird.

Arten der PCR-Analyse für Hepatitis C

Es gibt drei Arten von PCR-Analysen:

  1. Qualitative Analyse der PCR. Die erste Phase der Studie. Damit können Sie das genetische Material des Virus im Blut identifizieren.

  • Quantitative Analyse der PCR. Ermöglicht die Bestimmung der Viruslast - der Konzentration des Erbguts des Erregers in einem Milliliter Blut. Diese Studie wird vor Beginn der Therapie durchgeführt und dann in der ersten, vierten, zwölften und (wenn der Kurs lang ist) vierundzwanzigste Behandlungswoche, um ihre Wirksamkeit zu bewerten.

  • Genotypisierung Der Erreger der Hepatitis C mutiert häufig und schnell. Es wurden sieben Varianten dieses Virusgenotyps auf dem Planeten gefunden. In Russland sind der erste, zweite und dritte Typ üblich. Jeder der Genotypen hat eine unterschiedliche Resistenz gegen die Therapie, zum Beispiel beträgt die Wirksamkeit der Behandlung des ersten Typs sechzig Prozent, und für den zweiten und den dritten Wert liegt diese Zahl bei 85. Um die geeigneten Medikamente auszuwählen und eine Behandlungsdauer von ausreichender Dauer vorzuschreiben, ist es daher notwendig, genau zu bestimmen, mit welchem ​​Virustyp der Patient infiziert ist.
  • Indikationen für die PCR-Analyse bei Hepatitis C

    PCR-Studie wird in den folgenden Fällen vorgeschrieben:

    • Kontakt mit einer kranken Person, bei der eine Infektion auftreten könnte;
    • positiver Enzymimmuntest;
    • Anzeichen einer Zirrhose: Veränderungen der Lebergröße, Vergrößerung der Milz, Erscheinung des Unterleibs des Plexus subkutane Venen;
    • das Auftreten von Symptomen einer Leberschädigung: Schmerzen im rechten Bauch, Gelbfärbung der Haut;
    • erhöhte Aktivität von ALT und AST in der biochemischen Analyse von Blut;
    • vor Beginn der Behandlung zur Bestimmung der Viruslast;
    • zur Überwachung der Wirksamkeit einer antiviralen Therapie;
    • nach der Behandlung zur Kontrolle des Rückfalls;
    • bei Vorhandensein einer diagnostizierten Hepatitis B, um gemischte Leberschäden auszuschließen.

    Erläuterung von PCR-Studien zu Hepatitis C

    Die Dekodierung der PCR-Analyse und des Enzymimmunoassays gegen Hepatitis C sollte von einem Hepatologen oder Infektionskrankheiten-Spezialisten durchgeführt werden. Die Analyse der PCR-Ergebnisse ist in Kombination mit den Daten der biochemischen Analyse von Blut, Biopsie und Ultraschall erforderlich. Nur ein qualifizierter Arzt kann die Forschungsergebnisse analysieren und darauf basierend die korrekte Behandlung vorschreiben.

    Entschlüsselung der qualitativen Analyse.

    In dem untersuchten biologischen Material fand sich das Erbgut des Erregers. Infektion bestätigt

    Eine Infektion fehlt oder die RNA-Menge des Erregers liegt unter der Empfindlichkeitsgrenze.

    Quantitative Analyse entschlüsseln.

    Normale Rate für gesunde Menschen. Dies bedeutet, dass das untersuchte Material keine Hepatitis-C-RNA enthält oder seine Konzentration unter der Empfindlichkeitsschwelle der Studie liegt.

    Die RNA-Konzentration liegt unter dem Bereich der Quantifizierung. Diese Ergebnisse werden sehr sorgfältig interpretiert, korrelieren sie mit Daten aus anderen Studien, die häufig erneut untersucht werden.

    Das Viruslastniveau bei einer bestimmten Konzentration wird als gering angesehen. Normalerweise bedeutet eine Abnahme der Virusmenge, dass die Therapie erfolgreich ist.

    Mehr als 8 * 10 ^ 5 IE / ml

    Die Viruslast bei einer bestimmten Konzentration wird als hoch angesehen.

    Mehr als 2,4 * 10 ^ 7 IE / ml

    Die RNA-Menge liegt über der oberen Grenze des Quantifizierungsbereichs. Es ist unmöglich, mit diesem Ergebnis Rückschlüsse auf den Grad der Viruslast zu ziehen. In solchen Fällen wird der Test normalerweise mit der Verdünnung einer Blutprobe wiederholt.

    Genotypisierung entschlüsseln

    Erkannte RNA eines bestimmten Genotyps

    Hepatitis-C-Virus eines bestimmten Genotyps und Subtyps wurde im Biomaterial nachgewiesen. Das Ergebnis ist in römischen Ziffern und lateinischen Buchstaben codiert, zum Beispiel - 1a, 2b. Insgesamt gibt es sieben Genotypen und 67 Subtypen, in Russland gibt es jedoch nur drei erste Typen.

    Hepatitis-C-Virus-RNA nachgewiesen

    RNA wurde im Blut eines seltenen Genotyps für Russland gefunden, der nicht dem ersten, zweiten oder dritten Typ zugeordnet werden kann. Weitere Forschung ist erforderlich.

    Dieses Ergebnis zeigt an, dass der Patient gesund ist oder dass die Menge der Erreger-RNA zu gering ist.

    Es ist möglich, dass die PCR-Analyse für Hepatitis C negativ ist und der Enzym-Immunosorbent-Assay Antikörper gegen das Virus erkennt. Dies bedeutet, dass der Patient eine akute Hepatitis C hatte und sich selbst erholte. Etwa zwanzig Fälle einer Infektion führen zu einer spontanen Erholung, wenn der Körper des Patienten ausreichend resistent gegen die Infektion ist.

    Obwohl es sich bei der PCR um einen sehr genauen Assay handelt, können die Ergebnisse in den folgenden Situationen verzerrt sein:

    • das Blut wurde unter ungeeigneten Bedingungen in das Labor transportiert, die Temperatur wurde verletzt;
    • die Biomaterialprobe wurde kontaminiert;
    • im Blut waren Spuren von Heparin und anderen Antikoagulanzien vorhanden;
    • Die Ermittler waren Inhibitoren - Substanzen, die die Polymerase-Kettenreaktion verlangsamen oder stoppen.

    Die Vorteile der PCR gegenüber anderen Methoden

    1. Diagnose im frühen Stadium. Die PCR erkennt das genetische Material des Erregers. Mit Hilfe der Immunfluoreszenzanalyse können nur Immunglobuline bestimmt werden - Substanzen, die der Körper als Reaktion auf eine Infektion produziert. Im Falle einer Infektion mit Hepatitis C kann das Intervall zwischen der Infektion und dem Einsetzen der Immunreaktion mehrere Wochen und Monate betragen, zu diesem Zeitpunkt ist der ELISA unwirksam. Die PCR gibt in der ersten Woche nach der Infektion eine Antwort.

  • Geringe Fehlerwahrscheinlichkeit Bestimmen Sie in dem untersuchten Material den Bereich des genetischen Materials, der nur für einen Typ von Pathogenen charakteristisch ist. Dadurch werden falsche Ergebnisse ausgeschlossen. Wenn ELISA-Fehler möglich sind, da derselbe Antikörpertyp gegen verschiedene Viren freigesetzt werden kann - solche Antikörper werden Kreuzantikörper genannt.

  • Hohe Empfindlichkeit Mit der PCR kann die RNA des Erregers bereits in minimalen Mengen nachgewiesen werden. Dadurch können versteckte Infektionen erkannt werden.
  • Wie bereite ich mich auf die Blutspende für PCR-Studien vor?

    Für die PCR-Analyse von Hepatitis C wird venöses Blut gesammelt. In der Regel werden jeweils zwei Blutportionen aus der Vene des Patienten entnommen: Die erste wird zur PCR und die zweite per ELISA geschickt. Dies geschieht, um genauer einzuschätzen, wie stark ein Patient mit einem Virus infiziert ist und wie Immunität dagegen ankämpft.

    Normalerweise muss der Patient die folgenden Regeln befolgen:

    • morgens wird eine Blutuntersuchung durchgeführt;
    • Der Abstand zwischen der letzten Mahlzeit und der Blutspende sollte acht bis zehn Stunden betragen.
    • zwei oder drei Tage vor der Analyse müssen gebratene und fetthaltige Lebensmittel sowie Alkohol weggelassen werden.
    • 24 Stunden vor der Analyse sollte der Patient körperliche Anstrengung vermeiden: keine Gewichte tragen, nicht ins Fitnessstudio oder in den Pool gehen.

    Dekodierung der PCR-Analyse bei Hepatitis C

    Eine spezielle Laborstudie - die Analyse der PCR bei Hepatitis C - vereinfacht die Diagnose dieser Viruserkrankung erheblich. Hepatitis C stellt keine Ausnahme dar. Eine kleine Blutprobe kann auf den Gehalt an Rna und anderem genetischen Material des Viruswirkstoffs getestet werden. Alle Personen mit Antikörpern gegen Hepatitis C, die im Blutplasma zirkulieren, werden einer PCR-Analyse unterzogen, deren Anwesenheit den qualitativen Nachweis bestätigt.

    Die Interpretation der Ergebnisse wird in der Spalte der Forschungsform als "positive" oder "negative" Analyse interpretiert. Darüber hinaus ist es mit PCR möglich, nicht nur den minimalen Virusgehalt zu bestimmen, sondern auch die Anzahl der Partikel zu zählen. Somit ist es möglich, die geschätzte Viruslast zu bestimmen und die medizinischen Behandlungstaktiken so genau wie möglich zu bestimmen.

    Viraler Leberschaden

    Die Leber als Bestandteil des Verdauungstraktes ist eine große Belastung. In seinen Zellen treten die meisten Stoffwechselreaktionen aller Arten von Stoffwechsel auf, was eine optimale Funktion aller Organe und Systeme gewährleistet. Gleichzeitig ist der Entgiftungswert für die Entfernung von Schlacken und Stoffwechselprodukten mit enzymatischer Galle groß.

    Die Niederlage der Leber durch Viren unterschiedlicher Natur ist für den Körper äußerst gefährlich. Ein vielfältiges Krankheitsbild und die Nichteinhaltung der Behandlung führen die Hepatitis in Bezug auf Gesundheitsrisiken an die erste Stelle. Hepatitis C ist chronisch und kann für lange Zeit negativ sein und im menschlichen Körper langsam parasitieren. Das Virus wird durch biologische Flüssigkeiten übertragen: Blut und seltener durch Samen. Drogenkonsum von nicht sterilen Spritzen, natürliche Zufuhr infizierter Frauen, Unfallverletzungen oder Kürzungen durch Angehörige der Gesundheitsberufe können zur Übertragung des Virus auf gesunde Menschen führen.

    Die rechtzeitige Diagnose der Krankheit wird durch das versteckte Krankheitsbild und die unsystematische Pathologie behindert. Ein positives Ergebnis kann durch schlecht durchgeführte Analysen einfach übersehen werden. Nur eine signifikante Schädigung der Leberzellen verursacht eine gewisse Symptomatik, die negative Wirkung der Virämie lässt dann jedoch keine Chance mehr, das Organ wiederherzustellen.

    Die moderne Medizin hat spezielle Methoden entwickelt, um die geringsten Spuren des Virus zu erkennen. PCR, IFA, Leberbiopsie kann die geringste Schädigung der Leber und die minimale Menge an Antikörpern gegen das Virus erkennen. Die Analyse mit Hilfe der PCR ist in der diagnostischen Praxis die einfachste und zuverlässigste.

    Qualitative Analyse

    Die Essenz der Polymerasereaktion ist die Erzeugung einer Sequenz von rna. Die Reaktion wird in Gegenwart der gleichen Virusproteine ​​im Blutplasma durchgeführt.

    Spezielle Katalysatoren ermöglichen die Synthese einer ähnlichen viralen Sequenz der Kette, die mit den bekannten Nukleotiden der viralen RNA verglichen wird. Darauf basierend ermitteln sie die Viruslast und Leberschäden.

    Die PCR kann sogar nur einmal das gewünschte Gen im Blut aufnehmen. Eine solche diagnostische Kettenreaktion ist auch sehr spezifisch. Die Sequenz der Nukleotidketten ist für jede Kreatur einzigartig, so dass enzymatische Primer identische Sequenzen der gewünschten genetischen Information erzeugen. Somit kann jedes Virus mit der geringsten Genauigkeit erkannt werden, selbst wenn sein quantitativer Indikator extrem klein ist.

    Patienten, in deren Blut Antikörper gegen Virushepatitis gefunden wurden, führen eine qualitative Studie der PCR oder Eph durch. Das Ergebnis der Analyse kann sowohl positiv als auch negativ sein, was in beiden Fällen einer Behandlung bedarf.

    Die positive Reaktion der Kettenreaktion sollte als Vorhandensein von RNA-Fragmenten des Hepatitis-Virus oder als Infektionserscheinung entschlüsselt werden.

    Im Blutplasma vermehrt sich das Virus derzeit aktiv und parasitär über die Leberzellen. Die PCR-Diagnostik kann eine negative Antwort geben, wenn im Plasma nur wenige Partikel der viralen RNA vorhanden sind, die unter dem Sensitivitätsniveau des Tests oder gar nicht liegen. Nach einer direkten Infektion wächst die Virusmenge relativ langsam und erst nach 1-2 Wochen können sie durch ifa oder andere qualitative Untersuchungen isoliert werden.

    Eine negative Analyse kann in folgenden Fällen erhalten werden:

    1. Wenn Sie Material unter ungeeigneten Bedingungen entnehmen, nehmen Sie eine Blutprobe mit Kontaminationen auf.
    2. Wenn ein Patient zuvor Heparin-Injektionen erhalten hat.
    3. Bei Anwesenheit von anderen Enzymen und Substraten in den Proben, die den Verlauf der Kettenreaktion stören.

    Quantitative Analyse

    Quantitativer Test als mikrobiologische Diagnose dient zur Bestimmung der Viruslast. Eine bestätigte qualitative Analyse für Virämie dient als Grundlage für die Bestimmung der Menge an genetischem Material und seiner Konzentration. Die Anzahl der nachgewiesenen viralen Viren wird in einer Einheit des Blutvolumens bestimmt, üblicherweise in 1 Milliliter. Die erforderlichen Materialien werden in internationalen Einheiten ausgedrückt, einige Laboratorien verwenden die Anzahl der Exemplare für die Analyse von EIF.

    Normalerweise wird die PCR vor einem therapeutischen Schema quantitativ analysiert. Das Zählen von viralem Rna wird oft durchgeführt: nach einer, vier, zwölf und vierundzwanzig Wochen. Die 12. Woche wird als Richtwert betrachtet, da auf Basis der Analyse während dieser Zeit die Interpretation der Wirksamkeit der therapeutischen Maßnahmen durchgeführt wird.

    Bei der quantitativen Analyse mittels PCR oder IFA werden Proben aus einer Vene entnommen.

    Die Interpretation der Ergebnisse als hohe Viruslast beginnt bei 800.000 IE / ml. Ein solches positives Ergebnis für Hepatitis C spiegelt die Anwesenheit von mindestens 3.000.000 Kopien pro Milliliter Blut wider. Der niedrige Virämiepegel endet bei 400.000 IE / ml. Die Ergebnisse der Studie können Werte als negative Antwort sein, sowie der Indikator "unter dem Messbereich".

    Ein quantitativer Test mit einer Schätzung von „unter dem Messbereich“ besagt, dass die RNA während der Reaktion nicht berechnet werden konnte. Das Virus zirkuliert immer noch im Körper, wie ein positiver qualitativer Test zeigt. Ein negativer Indikator für die quantitative Analyse von pcr oder ifa weist auf das Fehlen von Rna in dieser Blutprobe hin.

    Trotz begrenzter Übertragungswege des Virus durch das Blut steigt das Risiko einer Übertragung des Virus durch die Sekretion der Geschlechtsdrüsen von der Mutter auf das Kind.

    Die quantitative Analyse bietet erhebliche Unterstützung bei der Bewertung therapeutischer Interventionen. Ifa und PCR spiegeln die Wirkung von antiviralen Medikamenten wider, helfen, den Zeitpunkt der Therapie festzulegen und die Bildung der Immunität der Patienten zu beurteilen. Das frühe negative Ansprechen von Labortests weist auf eine erfolgreiche Behandlung und die Notwendigkeit hin, die Therapiedauer zu verkürzen. Der langsame Rückgang der Virämie kann als die Notwendigkeit verstanden werden, den therapeutischen Verlauf zu ändern. Die Höhe der Viruslast bestimmt die Prognose der Krankheit. Hepatitis mit einer niedrigen Rate wird wahrscheinlich einfach behandelt und das Virus kann vollständig aus dem Körper entfernt werden. Hohe Virusraten im Blut erfordern eine sorgfältige und vielseitige Behandlung.

    Qualitative Analyse für Hepatitis C

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    Eine qualitative Analyse der Polymerase-Kettenreaktion - PCR für Hepatitis C bestimmt die Anwesenheit oder Abwesenheit von HCV im Körper. Unter Laborbedingungen wird die Struktur der RNA untersucht, zu der auch das Virus gehört. Im Falle des Nachweises des Virus C ist eine Behandlung erforderlich, da der vernachlässigte Zustand der Leber schwerwiegende Folgen hat. Eine hochwertige PCR wird auch nach der Erholung durchgeführt, um das Fehlen von Antikörpern zu bestätigen. Zugewiesen zur Routineüberprüfung. Bei einer geringen Konzentration des Erregers im Blut kann die PCR (qualitativ) möglicherweise nichts erkennen, da das Diagnosesystem eigene Empfindlichkeitsschwellen aufweist. Im Anfangsstadium der Erkrankung oder bei milder Form wird die PCR-Ultra-Diagnostik an extrem empfindlichen Geräten durchgeführt.

    Was ist RNA-Virus?

    Der Begriff RNA des Hepatitis-C-Virus (oder Hepatitis-C-Virus-RNA) ist die Lebererkrankung selbst. Virus C bindet an die gesunde Körperzelle, indem es in das Innere eindringt. Im Laufe der Zeit, im ganzen Körper verteilt, ist es nur notwendig, ins Blut zu gelangen. Infolgedessen dringt der Erreger in die Leber ein, verschmilzt mit seinen Zellen und arbeitet hart. Leberzellen (Hepatozyten) arbeiten unter ihrem Einfluss, verändern sich und sterben daran. Je länger sich das Virus C in der Leber befindet, desto mehr sterben die Zellen ab. Im Laufe der Zeit entwickeln sich gefährliche Krankheiten, die zu bösartiger Degeneration und zum Tod führen.

    Eine Infektion der Leber mit dieser Art von Virus kann sich äußerlich nicht äußern. Eine infizierte Person fühlt sich seit vielen Jahren oder Jahrzehnten vollkommen gesund, und nur eine zufällige Untersuchung zeigt meist die Pathologie. Bei der Blutspende für Hepatitis wird ein Teil der RNA-Kette (Ribonukleinsäure) untersucht, die Teil des menschlichen Gens (DNA) ist. Die Ergebnisse von Labortests sollten nicht für die Selbstbehandlung verwendet werden, da dies nur ein Indikator ist. Das genaue Bild und die weitere Diagnose werden vom Arzt besser bestimmt.

    Wenn fertig: Hinweise für die Forschung

    Zur Bestätigung von HCV wird eine PCR-Analyse durchgeführt (Polymerasekettenreaktion). PCR-Studien helfen, das Erregermaterial in der RNA-Struktur zu finden und eine wirksame Therapie vorzuschreiben. In folgenden Fällen ernannt:

    • Erkennung von Anzeichen einer Leberentzündung;
    • Vorsorgeuntersuchungen;
    • Untersuchung von Kontaktpersonen;
    • Diagnose einer Hepatitis gemischten Ursprungs (Bestimmung des Haupterregers);
    • Bestimmen des Ausmaßes der Reproduktionsaktivität des Virus in der chronischen Form;
    • Leberzirrhose;
    • um die Wirksamkeit der verordneten Behandlung zu bestimmen.
    Forschungs-PCR verschreibt einen Arzt, um die Wirksamkeit der Behandlung von Hepatitis zu bestimmen.

    Es gibt eine qualitative sowie quantitative Analyse der PCR. Quantitative PCR zeigt das prozentuale Verhältnis von RNA zu Virusträgern im Blut, und qualitativ zeigt das Vorhandensein oder Fehlen von Viren. Ein positiver Qualitätsindikator (Vorhandensein von Hepatitis C-RNA) erfordert auch quantitative Forschung. Eine hohe Konzentration des Erregers der Hepatitis C ist mit dem Risiko der Übertragung, das heißt der Infektion anderer, verbunden. Niedrige Zählungen sind besser behandelbar. Die Menge an RNA-Viren im Blut hängt nicht von der Intensität der Erkrankung ab. Die PCR-Analyse wird auch bei der Interferontherapie durchgeführt, um die Dauer und Komplexität des Behandlungsverlaufs vorzugeben.

    Merkmale der qualitativ hochwertigen PCR-Analyse bei Hepatitis C

    Allen Patienten, die Antikörper gegen Hepatitis C im Blut haben, wird eine qualitative Analyse mit dem Polymerase-Kettenreaktionsindex zugeordnet. Kranke und erholte Patienten müssen den Test erneut durchführen. Es wird empfohlen, den Test auf Hepatitis B zu bestehen, dann bei positivem Ergebnis und auf Hepatitis D. Außerdem sollte eine qualitativ analysierte Reaktion in Verbindung mit anderen Blutuntersuchungen durchgeführt werden. Analysen zeigen ein vollständiges Bild der Ausbreitung von Viren.

    Von den Testergebnissen ist nur ein positiver Test auf Hepatitis C sichtbar oder negativ, dh das Vorhandensein oder Fehlen eines Virus. Wenn die Ausgabe "erkannt" wird, ist und bleibt der Virus aktiv. Die Bezeichnung "nicht erkannt" zeigt das Fehlen eines Virus oder dessen geringe Menge an. Bei diesem Indikator ist zu berücksichtigen, dass die analytische Empfindlichkeit diagnostischer Systeme unterschiedlich ist und RNA-Hepatitis C möglicherweise noch im Blut ist, sich aber in der Analyse nicht manifestiert.

    Besonders empfindliche PCR-Methode, Ultrahepatitis C, zeigt sich auch in mageren Mengen. Es wird eine Fluoreszenz-Hybridisierungsstudie verwendet, die um ein Vielfaches höher ist als bei Standard-PCR-Systemen. Die Methode wird in mehreren Fällen verwendet:

    • vermutete versteckte Formen von Hepatitis C;
    • Die PCR-Diagnostik bestätigte den Erreger nicht, es gibt jedoch Antikörper.
    • im Falle einer Genesung;
    • frühe Infektion zu erkennen.
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    Dekodierungsanalyse

    Die PCR-Dekodierung von HCV beeinflusst die endgültige Entscheidung insbesondere bei der Diagnose mit der Ultrametod-Methode. Der Hauptnachteil dieser Studie ist die strikte Einhaltung der sterilen Bedingungen für Probe und Material. Eine geringfügige Abweichung zeigt manchmal ungenaue analytische Schlussfolgerungen und erschwert die Diagnose und die nachfolgende Behandlung. Die Analyse der PCR zur Bestimmung von Hepatitis-RNA zeigt nicht immer sicher ein Bild der Krankheit, manchmal sind Ungenauigkeiten erlaubt und in beide Richtungen.

    Bei der Diagnose des Hepatitis-Virus wird eine umfassende Untersuchung empfohlen.

    Norm der Indikatoren

    Das Fehlen von JgM-Antikörpern gegen Virushepatitis C in den Ergebnissen der Studie gilt als Norm bei der Analyse der Polymerase-Kettenreaktion. Gleichzeitig deuten die Ergebnisse der serologischen Analyse auf das Vorhandensein von Antikörpern gegen das C-Virus hin und dies liegt ebenfalls im normalen Bereich. Eine qualitative Definition zeigt nicht die Intensität der Erkrankung, sondern nur den Erreger der Hepatitis C in der RNA. Diese Analyse wird nach der Behandlung wiederholt, um die tatsächliche Erholung zu bestätigen.

    Abweichungen

    Wenn JgM-Antikörper gegen HCV-RNA vorhanden sind, deutet dies auf eine sich entwickelnde Infektion hin. Die Krankheit verläuft gleichzeitig akut oder chronisch und manifestiert sich in verschiedenen Stadien. Wenn eine Abnahme der Anzahl der Antikörper festgestellt wird, zeigt die Analyse an, dass die Ergebnisse der Behandlung während der Genesung erzielt wurden. Nur äußerst seltene Fälle von Fehlalarmen werden in der Diagnose gefunden. Sie werden bei Frauen während der Schwangerschaft und bei Menschen mit anderen Infektionskrankheiten gefunden.

    Qualitative und quantitative Analyse der PCR für Hepatitis C: negativ, positiv, Transkript

    Hepatitis C ist eine virale Lebererkrankung, die durch das Flavivirus-HCV (vom englischen Wort Hepatitis-C-Virus) verursacht wird, dessen Struktur ein Ribonukleinsäuremolekül (RNA) enthält. RNA trägt den genetischen Code des Virus. Seine Anwesenheit erlaubt die Analyse der PCR auf Hepatitis C.

    Die HCV-Gefahr für eine Person besteht darin, dass das sogenannte serologische Fenster (die Zeit zwischen der Infektion und dem Auftreten einer Reaktion des Immunsystems) ziemlich lang sein kann - von mehreren Wochen bis zu sechs Monaten.

    Es erkennt keine Infektion und beginnt rechtzeitig mit der Behandlung.

    Abhängig von den individuellen Merkmalen des Organismus kann sich der Träger von HCV in einer akuten Form manifestieren sowie als chronische Erkrankung auftreten, die eine lange und kostspielige Behandlung erfordert. Wenn Antikörper gegen HCV nachgewiesen werden, werden eine Reihe von Labortests durchgeführt, einschließlich der PCR für Hepatitis C. Dieser Test wird für alle Personen durchgeführt, bei denen Blut-Antikörper gegen HCV gefunden wurden.

    Was ist PCR-Analyse?

    Laboranalyse der PCR für Hepatitis C - die Untersuchung von biologischem Material zum Nachweis des Vorhandenseins von Flavavirus.

    Die Polymerase-Kettenreaktion (so wie die Abkürzung steht) zeigt den quantitativen Wert der viralen Läsion des Körpers, seine qualitativen Merkmale sowie den Genotyp des RNA-haltigen Virus.

    Auf ihrer Basis sowie auf Basis zusätzlicher Analysen werden die Art und Dauer der Therapie sowie der epidemiologische Faktor (Grad der Übertragung auf einen anderen Träger) bestimmt.

    Was ist Hepatitis-C-RNA-Analyse?

    Hepatitis-C-PCR wird auch als RNA-Analyse (HCV-RNA) bezeichnet, weil Das Flavavirus enthält ein RNA-Partikel mit einer Viriongröße von 30 bis 60 nm. Ein Merkmal dieses Mikroorganismus ist die hohe Neigung zu Mutationen.

    Jede der Unterarten (Genotypen) des Virus hat eine unterschiedliche Resistenz, was zu unterschiedlichen Behandlungsmethoden und der Art der weiteren Prognose für den Patienten führt.

    Biologisches Material (venöses Blut) wird auf leeren Magen verabreicht und in der Regel mit der Real-Time-PCR-Methode (hochempfindliche Echtzeitdiagnostik mit einer unteren Nachweisgrenze von 15 IE / ml unter Verwendung geschlossener automatisierter Systeme) getestet.

    Es gibt andere Tests, beispielsweise COBAS AMPLICOR mit einer Empfindlichkeit von 50-100 IE / ml. Für jeden Labortest ist die Empfindlichkeitsschwelle wichtig, d. H. die Fähigkeit des Reagens, die minimale Viruskonzentration in biologischem Material nachzuweisen.

    Arten der Analyse von Hepatitis C durch PCR

    Hepatitis-C-PCR umfasst drei wichtige Komponenten:

    • qualitative Analyse;
    • quantitative Analyse;
    • Genotypisierung.

    Diese Tests ermöglichen es Ihnen, die Art der Virämie sowie die genetischen Merkmale des Erregers zu bestimmen. Abhängig von der Empfindlichkeit des Diagnosesystems wird die Studie einmal durchgeführt, und manchmal wird ein zweiter Test mit einem empfindlicheren Reagens durchgeführt, um die Ergebnisse zu bestätigen oder zu verfeinern.

    Hochwertige PCR von Hepatitis C

    Hepatitis-C-PCR-Analyse ist eine weitere häufige Bezeichnung für die Analyse der Polymerase-Kettenreaktion. Die Standardempfindlichkeit des Tests, mit der das Vorhandensein viraler Läsionen nachgewiesen werden kann, liegt im Bereich von 10 bis 500 IE / ml.

    Eine negative PCR-Analyse für Hepatitis C zeigt, dass die Viruskonzentration im Blut des Patienten unter der Empfindlichkeitsschwelle des Diagnosesystems liegt.

    Wenn die PCR mit hoher Qualität die Antwort "nicht erkannt" ergab, ist es für die nachfolgende Behandlung wichtig, die Empfindlichkeitsschwelle des Reagens herauszufinden.

    Proteinfraktionen zu Flavavirus erscheinen viel später.

    Hepatitis C Quantitative PCR

    PCR-Hepatitis C quantitativ ist ein Indikator für die Viruslast, die die RNA-Konzentration des Flavavirus im Körper widerspiegelt. Dies ist ein Indikator, der anzeigt, wie viele Fragmente viraler RNA pro Kubikzentimeter Blut enthalten sind. Die Ergebnisse der PCR von Hepatitis-C-RNA in einem quantitativen Test im herkömmlichen System sind in internationalen Einheiten pro Milliliter (IE / ml) angegeben und können auf verschiedene Arten aufgezeichnet werden, beispielsweise 1,7 Millionen oder 1,700,000 IE / ml.

    Die quantitative PCR-Diagnostik von Hepatitis C wird den Patienten vor Beginn der antiviralen Therapie und in Woche 12 der Behandlung verschrieben, um die Ergebnisse der gewählten Methode für den Umgang mit HCV auszuwerten. Die Viruslast ermöglicht die Bestimmung von drei wichtigen Indikatoren der Krankheit:

    • Infektiosität, d.h. das Risiko der Virusübertragung von einem Träger zu einem anderen (je höher die Konzentration der Flavavirus-RNA ist, desto höher ist die Wahrscheinlichkeit, dass eine andere Person infiziert wird, beispielsweise durch sexuellen Kontakt);
    • Methode und Wirksamkeit der Behandlung;
    • Dauer und Prognose der antiviralen Therapie (je höher die Viruslast, desto länger dauert die Behandlung).

    Die quantitative PCR-Diagnostik von Hepatitis C hängt von der Art des Labortests und der Empfindlichkeitsschwelle ab. Als untere Grenze der Norm gilt der Indikator bis 600.000 IE / ml, der Durchschnittswert liegt zwischen 600.000 und 700.000 IE / ml. Ergebnisse von 800.000 IE / ml und mehr gelten als hohe Mengen an RNA-haltigem Virus.

    Genotypisierung

    Aufgrund der hohen Mutationsaktivität von HCV in der Natur ist es beim Test wichtig zu ermitteln, welcher Virusgenotyp im Blut des Patienten vorhanden ist. Insgesamt wurden auf dem Planeten 11 Genotypen des Hepatitis-C-Virus nachgewiesen, zu denen viele Unterarten (Subtypen) gehören. Auf dem Territorium der Russischen Föderation verteilt 1,2 und 3.

    Hepatitis-C-PCR-RNA ist zusammen mit der Genotypisierung ein sehr wichtiger Bestandteil der Analyse ermöglicht dem Arzt, die Resistenz (Resistenz) des Virus zu bestimmen, die geeigneten Medikamente auszuwählen und eine Behandlung vorzuschreiben.

    Durch die Genotypisierung können Sie auch indirekt den Zustand der Leber bestimmen. Zum Beispiel wird der 3-Genotyp von HCV häufig von einer Steatose begleitet, bei der sich Fett in den Zellen des Organs ansammelt.

    Ein Bluttest auf PCR für Hepatitis C sollte eine Zahl ergeben, die den Genotyp bestimmt. Laborreaktionen können als „nicht typisiert“ bezeichnet werden. Dies bedeutet, dass sich ein Virus im menschlichen Blut befindet, das vom Testsystem nicht erkannt wird. Dies kann darauf hindeuten, dass der Genotyp für ein bestimmtes geografisches Gebiet nicht typisch ist. In diesem Fall sollten Sie die Analyse mit einer höheren Empfindlichkeit des Diagnosesystems wiederholen.

    Dekodierung der PCR-Analyse bei Hepatitis C

    Der Test zur quantitativen Entschlüsselung der Hepatitis C-PCR kann auf den obigen Daten basieren. Wenn Sie die Ergebnisse von Labortests erhalten, werden normalerweise folgende Daten geschrieben:

    • "Gefunden" / "nicht gefunden" (hochwertige PCR für Hepatitis C);
    • die Anzahl der RNA enthaltenden Fraktionen, zum Beispiel 831.680 ME / ml (quantitative PCR-Analyse);
    • die Zahl, die den Genotyp von HCV bestimmt, zum Beispiel - 1, 2, 3, 4;
    • Der Name des Tests lautet meistens Echtzeit.

    Der wichtigste Punkt bei der Entschlüsselung der PCR-Analyse für Hepatitis C ist der zweite Absatz, in dem die Viruslast dargestellt wird, die die Prognose, Methode und Dauer der Behandlung bestimmt.

    Wenn der PCR-Test auf Hepatitis C negativ ist und der ELISA positiv ist - was bedeutet das?

    Um Labortests zu entschlüsseln, ist es wichtig, einen Hepatologen oder einen Spezialisten für Infektionskrankheiten zu kontaktieren, der die erhaltenen Informationen in Abhängigkeit von der Art des Diagnosesystems und seiner Empfindlichkeitsschwelle erläutert. In der medizinischen Praxis gibt es viele Daten von Blutuntersuchungen, die eine Person ohne medizinische Ausbildung in die Irre führen können.

    Wenn der Test auf Hepatitis-C-PCR beispielsweise negativ ist und der ELISA positiv ist, kann dies bedeuten, dass sich im Blut des Patienten momentan kein HCV befindet. Vorher erlitt er jedoch eine akute Form der Hepatitis C. Es wird vermutet, dass ein positiver Enzym-gebundener Immunosorbent-Assay (ELISA) dies zeigt Es gibt Antikörper im Blut, die nach der Invasion des Virus in der Vergangenheit produziert wurden. In der modernen medizinischen Praxis wird die ELISA-Analyse jedoch als unzureichend zuverlässig eingestuft und liefert oft untypische Ergebnisse. Daher verwenden Ärzte sie als primäres Screening. Bei der Diagnose einer Krankheit werden die Spezialisten durch PCR-Tests präzise geleitet.

    Nützliches Video

    Das folgende Video gibt eine sehr detaillierte und interessante Beschreibung des Wesens der PCR-Methode, wie die Analyse durchgeführt wird:

    Fazit

    Für die Analyse der PCR auf Hepatitis C wird normalerweise venöses Blut entnommen. Meist wird doppelt so viel biologisches Material aufgenommen - für ELISA und direkt für den PCR-Test. Für korrekte Testergebnisse ist die Einhaltung der Grundregeln für die Probenahme von biologischem Material im Labor erforderlich:

    • Blut zur Analyse wird in der ersten Hälfte des Tages auf leeren Magen gegeben.
    • zwischen Mahlzeit und Blutprobenahme sollte mindestens 8 Stunden dauern;
    • Alkohol und frittierte Speisen sollten ebenfalls vor der Prüfung ausgeschlossen werden.
    • Während des Tages vor der Blutspende ist es notwendig, hohe körperliche Anstrengungen zu vermeiden.

    Die Ergebnisse der Blutuntersuchung sind normalerweise am nächsten Tag verfügbar.


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