Antigen gegen HIV: Welche Rolle spielt die Diagnose?

Die Diagnose des Immunodeficiency-Virus erfolgt auf verschiedene Weise. Die beliebtesten in den letzten Jahren gewinnen jedoch hypersensitive Testsysteme. Mit ihrer Hilfe ist es möglich, diese Erkrankung frühzeitig zu erkennen. Dazu wird das HIV-Antigen verwendet, dessen Anwesenheit im Körper garantiert eine unangenehme und gefährliche Diagnose anzeigt. Es werden verschiedene Studien verwendet, um dies zu erkennen.

Warum ist die Reaktion von HIV 1, 2-Antigen-Antikörpern der verlässlichste Indikator für das Vorliegen eines Immunodeficiency-Virus?

Die Prüfung auf Immunodeficiency-Virus in öffentlichen medizinischen Einrichtungen ist kostenlos. Es wird jedoch in zwei Schritten produziert, falls erforderlich. Anfangs wird AH bis HIV nicht getestet. Die erste Analyse auf Vorhandensein oder Nichtvorhandensein dieser Krankheit zielt auf die Identifizierung von Antikörpern ab. Dies ist ein ELISA-Test. Mit dem Immunoassay können Personen identifiziert werden, bei denen garantiert ist, dass sie nicht an dem Immunodeficiency-Virus erkrankt sind (falls der Test nach allen Regeln durchgeführt wurde).

Sowie bedingt infiziert. Warum bedingt? Tatsache ist, dass Antikörper gegen HIV 1,2 im Gegensatz zu Hypertonie gegen dieses Virus aus anderen Gründen im Körper ausgeschieden werden. Worüber reden wir eigentlich? Dies ist vor allem bei Erkrankungen des Immunsystems möglich. Bei Problemen mit diesem lebenswichtigen System produziert der Körper zur Abwehr Antikörper, die mittels Enzymimmunoassay bestimmt werden, sowie solche, die bei dieser gefährlichen Krankheit auftreten. Wenn das Ergebnis des ELISA-Tests positiv ist, wird der Patient zu weiteren Untersuchungen geschickt, die auf der Identifizierung der Reaktion des Typs AG-AT 1,2 beruhen. Polikliniken verwenden häufig Immunblots. Dies ist der häufigste Assaytyp zum Nachweis des Immunodeficiency-Virus. Dabei werden Antigen und Antikörper gegen HIV 1 und 2 nicht nur nachgewiesen, sondern auch auf die Stärke der Reaktion getestet.

Was ist HIV-p24-Antigen?

Bevor wir darüber sprechen, wie das HIV-Antigen von HIV nachgewiesen werden kann, sollte erklärt werden, was es ist. Wissenschaftler haben schon lange herausgefunden, dass AG, das auf Testformularen und in Laboren mit p24-Markierung markiert ist, ein Capsid eines Retrovirus ist. Einfach ausgedrückt handelt es sich um ein Immunodeficiency-Virus-Protein. Die Bestimmung des HIV-Antigens ist ohne den Nachweis von Antikörpern des ersten und zweiten Typs nicht möglich. Weil Hypertonie stark mit Antikörpern verbunden ist. Sie werden im Körper als Immunreaktion auf das Auftreten von Antikörpern gebildet, die wiederum eine Art "Interventionist" sind, um das Immunsystem zu zerstören und gefährliches biologisches Material herzustellen.

Antikörper und Bluthochdruck gegen HIV Typ 1 und Typ 2 werden in Reaktion miteinander nachgewiesen. Erstere spielen im menschlichen Körper die Rolle von Fremdmolekülen. Letztere dienen als eine Art Protein- oder Polysaccharidentwickler. Im Falle des Immunodeficiency-Virus induziert AH eine Immunantwort. Dementsprechend werden sie in Medizin und Wissenschaft, die sich auf das Studium dieser Krankheit beziehen, als Immunogene eingestuft.

P24-HIV-Antigen 1 und 2-Typen werden nur durch eine umfassende Untersuchung von biologischem Material nachgewiesen. Am häufigsten wird venöses Blut zur Analyse verwendet. In einigen Fällen ist dies geeigneter Samen oder Sekret, der von den weiblichen Genitalorganen abgegeben wird. Der kombinierte HIV-Antigentest wird nach drei bekannten Verfahren durchgeführt. Über welche spezifischen Studien sprechen wir? Dies ist ein Immun-Blot, ein Combo-Test (HIV-Combo-Test) und ein Immunochemilumineszenz-Assay. Jeder von ihnen sollte separat besprochen werden.

Immun-Blot: Antikörper und Antigene gegen HIV 1 und 2

Wie oben erwähnt, ist das Immunblotting einer der häufigsten Tests, bei denen ein Antigen gegen HIV nachgewiesen wird. Wie wird es hergestellt? Der Patient entnimmt zunächst Blut aus einer Vene. Die Umfrage wird mit leerem Magen durchgeführt. Dreißig bis vierzig Minuten vor dem Patienten wird nicht geraucht. Die Essenz der Studie liegt in der Tatsache, dass die Reaktion des Antigen-Antikörpers stabil und untrennbar ist, wenn eine Person ein Immunodeficiency-Virus vom Typ 1 oder 2 im Körper hat. Das biologische Material der Testperson wird zuerst in ein spezielles Reagenz gespalten und dann auf einen Streifen gelegt, der in der Regel eine Blase mit Polystyrolzellen ist. Durch die Zugabe spezieller Reagenzien stellt der Techniker zunächst fest, ob diese Reaktion eintreten wird, und zieht anhand wiederholter Blutspülungen Rückschlüsse auf seine Widerstandsfähigkeit. Dies macht es möglich zu verstehen, ob es im Körper ein Immunodeficiency-Virus gibt, das in der Folge der wichtigste Faktor bei der Diagnosestellung ist.

Es wird empfohlen, einen AH-AT-Test für HIV, der mittels Immunblotting durchgeführt wird, frühestens vier bis fünf Wochen nach der beabsichtigten Infektion durchzuführen. Obwohl es sich bei diesem Test um ein System der vierten Generation handelt, gehört er nicht zum Überempfindlichen und hat einen Fehler von wenigen Prozent (von zwei bis drei).

Überempfindlichkeitsanalyse: HIV-Duo-HIV (Kombi) -Antikörper Typ 1, 2

Die Kombination aus HIV-Test (hiv) ag-ab (AG-AT) ist im Gegensatz zum Immunblotting überempfindlich. Experten auf dem Gebiet der Medizin behaupten, dass seine Verwendung innerhalb von zwei Wochen nach der angeblichen Infektion ratsam ist. Es zielt auf die Untersuchung spezifischer Antikörper ab, die eine Art Immunreaktion des menschlichen Körpers auf einen Eingriff wie das Immunodeficiency-Virus sowie auf AG p24 sind. HIV-Duo-HIV-Antikörper Typ 1 und 2 zielen auch darauf ab, Antikörper gegen diese gefährliche Erkrankung nachzuweisen. Mit seiner Hilfe ist es möglich, sie nicht nur im Blut zu entdecken, sondern auch die Art der Erkrankung zu bestimmen.

Der HIV-Kombinationsantigentest ist ein Kombinationstest. Es überprüft auch die Antigen-Antikörper-Reaktion, die das Vorhandensein einer schrecklichen Krankheit im Körper anzeigt.

Immunochemilumineszenz-Analyse: HIV 1,2 kombiniert mit HIV HIV-AT-AG IHLA

Der ILHL-Test für HIV at-ag ist ebenfalls überempfindlich. Grundlage dieser Studie ist eine Art Reaktion AG-AT. Die Besonderheit der Methode liegt bei ungefähr zweiundneunzig Prozent, während ihre Zuverlässigkeit zwischen achtundneunzig und neunundneunzig liegt. Daraus können wir schließen, dass eine solche Analyse einen Fehler aufweist, aber relativ klein ist. Und bei Bedarf einfach durch erneute Überprüfung überlappen. Eine solche Analyse wird innerhalb von zwei oder drei Wochen nach der geplanten Infektion durchgeführt.

Dieser kombinierte HIV-Test zielt auf die Untersuchung von venösem Blut ab, wenn das Vorhandensein von Immunodeficiency-Virus im Körper überprüft wird. Bei der Identifizierung anderer Krankheiten und Pathologien wird Urin oder Sekretflüssigkeit verwendet, die aus den Genitalien ausgeschieden wird. AT und AG für Immundefizienzvirus mit ILA werden auch auf Reaktion getestet. Zu diesem Zweck werden spezielle Reagenzien und Streifen mit Zellen verwendet. In mehreren Phasen der Studie durchgeführt, können Sie die Diagnose schnell und präzise feststellen oder widerlegen.

Alle obigen Verfahren zum Diagnostizieren des Immunodeficiency-Virus durch eine stabile AT-AG-Reaktion sind wirksam. Sie unterscheiden sich nur in den zulässigen Bedingungen der Studie. Der Arzt sollte entscheiden, welche Methode angewendet werden soll.

Serum-p24-Antigen

Ag p24 im Serum fehlt normalerweise.

Ag p24 ist ein HIV-Nukleotidwandprotein. Das Stadium der primären Manifestationen nach einer HIV-Infektion ist eine Folge des Beginns des Replikationsprozesses. Ag p24 erscheint 2 Wochen nach der Infektion im Blut und kann durch ELISA zwischen 2 und 8 Wochen nachgewiesen werden. Nach zwei Monaten nach Beginn der Infektion verschwindet Ar p24 aus dem Blut. In der Zukunft wird im klinischen Verlauf der HIV-Infektion ein zweiter Anstieg des p24-Proteingehalts im Blut festgestellt. Es fällt auf die Zeit der Entstehung von AIDS. Die bestehenden Testsysteme des ELISA zum Nachweis von Ar p24 werden zur Früherkennung von HIV bei Blutspendern und Kindern eingesetzt, um die Prognose der Erkrankung zu bestimmen und die Therapie zu überwachen. Das ELISA-Verfahren hat eine hohe analytische Empfindlichkeit, die den Nachweis von HIV-1 Ag p24 im Serum bei Konzentrationen von 5-10 pg / ml und weniger als 0,5 ng / ml HIV-2 und die Spezifität erlaubt. Es ist jedoch zu beachten, dass der Gehalt an Ar p24 im Blut individuellen Schwankungen unterliegt, so dass nur 20 bis 30% der Patienten anhand dieser Studie in der frühen Phase nach der Infektion identifiziert werden können.

AT bis Ag p24 der IgM- und IgG-Klassen im Blut treten ab der 2. Woche auf, erreichen für 2-4 Wochen einen Höchststand und bleiben für eine andere Zeit auf diesem Niveau - IgM-Klasse AT für mehrere Monate, verschwindet innerhalb eines Jahres nach der Infektion und AT IgG kann jahrelang bestehen bleiben.

Das Auftreten von AT-Klassen in verschiedenen Stadien der HIV-Infektion ist in Abb. 1 dargestellt.

Abb. Das Auftreten von AT-Klassen in verschiedenen Stadien der HIV-Infektion

Abb. Das Auftreten von AT-Klassen in verschiedenen Stadien der HIV-Infektion

Methoden zur Diagnose einer HIV-Infektion

Derzeit ermöglichen neue Diagnosetechnologien, ätiologische und pathogenetische Ursachen vieler Erkrankungen zu identifizieren und die Behandlungsergebnisse grundlegend zu beeinflussen. Die vielleicht beeindruckendsten Ergebnisse bei der Einführung dieser Technologien in die klinische Praxis wurden auf dem Gebiet der Immunologie und der Diagnose von Infektionskrankheiten erzielt.

Testsysteme, die auf einem Enzymimmunoassay und einer Immunochemilumineszenzanalyse basieren, ermöglichen den Nachweis von Antikörpern verschiedener Klassen, was die Informationsfähigkeit der Methoden der klinischen, analytischen Sensitivität und Spezifität für die Diagnose von Infektionskrankheiten signifikant erhöht. Es sei darauf hingewiesen, dass die bedeutendsten Fortschritte bei der Diagnose von Infektionen mit der Einführung der Methode der Polymerase-Kettenreaktion in die Laborpraxis verbunden sind, die als "Goldstandard" bei der Diagnose und Bewertung der Wirksamkeit einer Behandlung einer Reihe von Infektionskrankheiten gilt.

Für die Studie können verschiedene biologische Materialien verwendet werden: Serum, Blutplasma, Kratzen, Biopsie, Pleura- oder Cerebrospinalflüssigkeit (Liquor). Zunächst zielen die Methoden der Labordiagnostik von Infektionen auf die Erkennung von Krankheiten wie Virushepatitis B, C, D, Cytomegalovirus-Infektion, sexuell übertragbare Infektionen (Gonorrhoe, Chlamydien, Mycoplasma, Ureaplasma), Tuberkulose, HIV-Infektion usw.

Die HIV-Infektion ist eine Erkrankung, die durch das humane Immundefizienzvirus (HIV) verursacht wird, das lange Zeit in Lymphozyten, Makrophagen und Zellen des Nervengewebes verbleibt. Dies führt zu einer langsam fortschreitenden Schädigung des Immun- und Nervensystems des Körpers, die sich durch Sekundärinfektionen, Tumoren, subakute Enzephalitis und andere pathologische Erkrankungen manifestiert ändert sich.

Infektionserreger - humane Immundefizienzviren des 1. und 2. Typs (HIV-1, HIV-2) - gehören zur Familie der Retroviren, der Unterfamilie der langsamen Viren. Virionen sind kugelförmige Partikel mit einem Durchmesser von 100–140 nm. Das Viruspartikel hat eine äußere Phospholipidmembran, einschließlich Glycoproteine ​​(Strukturproteine) mit einem spezifischen Molekulargewicht, gemessen in Kilodalton. In HIV-1 ist dies gpl60, gpl20, gp41. Die innere Hülle des Virus, die den Kern bedeckt, wird auch durch Proteine ​​mit bekanntem Molekulargewicht dargestellt - p17, p24, p55 (HIV-2 enthält gpl40, gpl05, gp36, p16, p25, p55).

Das HIV-Genom umfasst RNA und das Enzym Reverse Transkriptase (Reverse Transkriptase). Damit das Retrovirus-Genom mit dem Genom der Wirtszelle verschmelzen kann, wird zunächst DNA unter Verwendung von Revertase auf der viralen RNA-Matrize synthetisiert. Dann wird die DNA des Provirus in das Genom der Wirtszelle eingefügt. HIV hat eine ausgeprägte antigene Variabilität, die viel höher ist als die des Influenzavirus.

Beim Menschen sind HIV-T-Lymphozyten das Hauptziel, da sie die höchste Anzahl von CD4-Rezeptoren auf der Oberfläche tragen. Nachdem HIV mit Hilfe von Revertase in die Zelle gelangt ist, synthetisiert das Virus DNA, die in den genetischen Apparat der Wirtszelle (CD4-Lymphozyten) eingefügt wird und sein Provirus lebenslang behält. Neben T-Lymphozyten-Helferzellen sind Makrophagen, B-Lymphozyten, Neurogliazellen, Darmschleimhaut und einige andere Zellen betroffen. Der Grund für die Abnahme der Anzahl der T-Lymphozyten (CD4-Zellen) ist nicht nur die direkte zytopathische Wirkung des Virus, sondern auch die Fusion mit nicht infizierten Zellen. Neben der Niederlage von T-Lymphozyten bei Patienten mit HIV-Infektion wird die polyklonale Aktivierung von B-Lymphozyten mit einem Anstieg der Synthese von Immunglobulinen aller Klassen, insbesondere IgG und IgA, und der anschließenden Abreicherung dieses Teils des Immunsystems festgestellt. Eine Fehlregulierung von Immunprozessen äußert sich auch in einem Anstieg des α-Interferon-Spiegels, β2-Mikroglobulin, einer Abnahme des IL-2-Spiegels. Infolge von Fehlfunktionen des Immunsystems, insbesondere mit einer Abnahme der Anzahl der T-Lymphozyten (CD4) auf 400 Zellen in 1 ul Blut oder weniger, treten Bedingungen für die unkontrollierte Replikation von HIV mit einer signifikanten Erhöhung der Anzahl von Virionen in verschiedenen Körpermedien auf. Durch die Niederlage vieler Teile des Immunsystems wird eine mit HIV infizierte Person gegen Krankheitserreger verschiedener Infektionen wehrlos.

Vor dem Hintergrund zunehmender Immunsuppression treten schwere fortschreitende Erkrankungen auf, die bei einem normal funktionierenden Immunsystem nicht auftreten. Dies sind Krankheiten, die von der Weltgesundheitsorganisation (WHO) als AIDS-Marker oder AIDS-indizierende Krankheiten identifiziert wurden.

AIDS-Indikatorerkrankungen

Die erste Gruppe besteht aus Erkrankungen, die nur für eine schwere Immundefizienz charakteristisch sind (CD4-Spiegel 74 100 Kopien / ml. Bei fast allen Patienten entsteht ein klinisches Bild von AIDS (Senior D., E. Holden, 1996).

Die Wahrscheinlichkeit, an AIDS zu erkranken, ist bei Personen mit einem HIV-1-Blutgehalt von> 10.000 Kopien / ml 10,8-fach höher als bei Personen mit einem HIV-1-Blutgehalt von 20.000 Kopien / ml (PCR). Die Ergebnisse der antiretroviralen Therapie bei HIV-Infizierten werden bewertet, um die HIV-Serum-RNA zu senken.

Bei einer wirksamen Behandlung sollte der Virämiepegel in den ersten 8 Wochen um das Zehnfache sinken und unter der Empfindlichkeitsgrenze der Methode (PCR) liegen (

Tabelle zur Entschlüsselung der Ergebnisse der HIV-Tests

Derzeit wird besonderes Augenmerk auf die Diagnose von HIV (Human Immunodeficiency Virus) beim Menschen gelegt. Ein frühzeitiges Erkennen der Krankheit hilft, den Behandlungsverlauf früh zu beginnen, und dies wird die Lebensdauer des Patienten erheblich beeinträchtigen.

Nach einem HIV-Test ist die Entschlüsselung der Ergebnisse in der Regel positiv oder negativ. In diesem Fall gibt es eine Primärdiagnose und eine Sekundärdiagnose. In der Grundschule wird eine Person mit ELISA überprüft. Bei Bedarf wird ein zweiter Bluttest auf HIV durchgeführt. Was bedeutet ein positives und ein negatives Ergebnis? Wie kann man einen HIV-Test entschlüsseln? Warum hat eine Person, die nicht drogenabhängig ist und Alkoholiker ist, einen dauerhaften Sexualpartner?

Über HIV

Die Erreger der Krankheit sind vom 1. und 2. Typ. Eine lange Zeit bleibt ihre Anwesenheit in einer Person unbemerkt, dann wird zuerst die Immunität und dann andere Systeme einer Person beeinträchtigt.

Bei der Hauptmethode der Labordiagnostik des Immunodeficiency-Virus werden Antikörper gegen HIV nachgewiesen. Der enzymgekoppelte Immunosorbent Assay (ELISA) ist die Grundlage der Methode, er ist empfindlich (99,5% und darüber) und spezifisch (99,8% und darüber). Bei der Diagnose von HIV durch ELISA wird zusätzlich das p24-Antigen bestimmt.

Jedes Testsystem verfügt über verschiedene Indikatoren. In diesem Zusammenhang identifizieren sie verschiedene Proteinstrukturen der Virushüllen. Die Erreger von HIV sind zwei Subtypen: 1. und 2. oder HIV-1 und HIV-2. Viruspartikel sehen aus wie eine Kugelform mit einer äußeren Phospholipidschale. Für den 1. Untertyp hat es das folgende Molekulargewicht: gp120, gp41, gp160. Der zweite Untertyp enthält gp105, gp36, gp140. Für die innere Hülle des Virus ist auch das Molekulargewicht bekannt. Für den 1. Untertyp ist es p55, p17, p24. Für das 2. - S. 16, S. 25, S. 55.

Zur Identifizierung eines Virus gibt es für jedes Testsystem drei Hauptproteinsätze.

Im Allgemeinen kann das ELISA-Ergebnis sein:

• negativ;
• falsch positiv;
• falsch negativ;
• zweifelhaft oder unsicher.

Diagnosemethoden sind nachgewiesene Antigene, Antikörper.

Über normales Ergebnis

Norma - was bedeutet das? Wenn ein HIV-Test negativ ist, wird dies als normal angesehen.

1. Mit der neuesten Generation von ELISA-Testsystemen können Sie das Vorhandensein von Antikörpern gegen HIV und Proteinpartikel bestimmen. Wenn die Analyse normal ist, werden keine Antikörper und Proteinpartikel des Erregers im Blut gefunden. Aber mit Sicherheit zu sagen, dass eine Person auf dieser Grundlage gesund ist, ist möglich, wenn vor dem Einsetzen für 3 Monate kein Infektionsrisiko bestand. Andernfalls müssen Sie nach einiger Zeit den Test wiederholen.

Es gab Fälle, in denen HIV erst nach 6 Monaten entdeckt wurde. Wenn das Ergebnis negativ ist und Kontakt mit einem HIV-infizierten Patienten bestand, ist es aus Gründen der Zuverlässigkeit erforderlich, die Tests nach drei, vier und sechs Monaten zu wiederholen. Es kommt vor, dass der ELISA zu einem negativen Ergebnis geführt hat und die Person eindeutig den Verdacht auf Anzeichen von HIV hat. Es wird empfohlen, den Test erneut zu bestehen. Ein fehlerhaftes Ergebnis ist aufgrund des frühen Zeitpunkts der Analyse oder aufgrund des menschlichen Faktors möglich.

2. Wenn das Ergebnis beim Erhalt des Immunblots negativ ist, ist dies derzeit die zuverlässigste Analyse.

Wenn eine Person ein Immunodeficiency-Virus hat und das Ergebnis negativ ist, liegt höchstwahrscheinlich ein medizinischer Fehler vor, der in jedem Stadium des Tests auftreten kann. Wenn das Immunoblot nach drei und sechs Monaten wiederholt wird und das Ergebnis negativ ist, dann gibt es nichts zu befürchten, es spricht von der Norm. Und erst nach einer negativen Reaktion des Immunoblots wird ein Zertifikat ausgestellt, dass die HIV-Analyse negativ ist.

3. Die PCR-Forschung bei Erwachsenen zur Diagnose des Immunodeficiency-Virus wird sehr selten angewendet, und für Neugeborene wird diese Methode angewendet.

Die Norm gilt auch hier als negatives Ergebnis.

4. Soziologischen Untersuchungen zufolge verwenden viele Menschen einen HIV-Schnelltest. Beim Anblick eines Negativstreifens beruhigen sich die Menschen und weigern sich, mit allen Anzeichen einer HIV-Infektion in eine medizinische Einrichtung zu gehen. Sie müssen jedoch wissen, dass die Genauigkeit des Schnelltests fünfundachtzig Prozent beträgt. Außerdem können Sie es zu Hause falsch halten oder die Lagerungsbedingungen werden verletzt. Es ist sogar noch wahrscheinlicher, dass das Ergebnis falsch ist. Sogar 8 Stunden vor dem Test von mineralischem alkalischem Wasser nehmen Einfluss auf das Testergebnis. Daher ist die Tatsache, dass das humane Immundefizienzvirus aufgrund eines Schnelltests nicht vorhanden ist, auch wenn es negativ ist, nicht immer die richtige Aussage.

Dekodierungsanalyse

Nachdem Menschen getestet wurden, stellt sich häufig die Frage, wie das Ergebnis der Forschung zu entschlüsseln ist, was zu tun ist, wenn ein positives Ergebnis für HIV erzielt wird.

1. Wenn der ELISA die Anwesenheit aller oder fast aller Antikörper gegen Antigene gemäß diesem Testsystem zeigte, bedeutet dies einen positiven HIV-Test. Wenn die Reaktion nach dem zweiten serologischen Enzym-Immunoassay positiv ist, muss ein Immunoblot durchgeführt werden. Das Entschlüsseln der Ergebnisse wird genauer sein. Wenn der Enzym-Immunoassay ein positives Ergebnis ergab, zeigte die folgende Immunblot-Analyse auch das Vorhandensein von HIV, dann wird das Endergebnis angegeben. Wenn Tests entschlüsselt werden, müssen Sie wissen, dass ein positiver HIV-Test durch Folgendes bestimmt wird:

• von 60% bis 65% 28 Tage nach der Infektion;
• 80% in 42 Tagen;
• in 90% nach 56 Tagen;
• 95% in 84 Tagen.

Wenn die Antwort auf HIV positiv ist, bedeutet dies, dass Antikörper gegen das Virus nachgewiesen wurden. Um eine falsch positive Antwort zu vermeiden, ist ein erneuter Test erforderlich, vorzugsweise zweimal. Wurden Antikörper gegen Immunschwäche festgestellt, wenn zwei Tests von zwei oder drei Tests von zwei durchgeführt wurden, wird das Ergebnis als positiv betrachtet.

Das Antigen p 24 kann innerhalb von 14 Tagen ab dem Tag der Infektion im Blut nachgewiesen werden. Bei Verwendung der Methode des Enzymimmunoassays wird dieses Antigen 14 bis 56 Tage lang nachgewiesen. Nach 60 Tagen liegt er nicht mehr im Blut. Nur wenn AIDS im Körper gebildet wird, wächst dieses p24-Protein im Blut nach. Daher werden Enzym-gebundene Immunosorbens-Assay-Systeme verwendet, um HIV in den ersten Tagen der Infektion zu erkennen oder um festzustellen, wie die Erkrankung fortschreitet, und den Behandlungsprozess zu überwachen. Hohe analytische Empfindlichkeit des Enzymimmunoassays detektiert p24-Antigen in biologischem Material mit HIV des ersten Subtyps in einer Konzentration von 5 bis 10 pkg / ml, mit HIV des zweiten Subtyps von 0,5 ng / ml und weniger.

2. Das zweifelhafte Ergebnis eines Enzymimmunoassays impliziert, dass bei der Diagnose von Ärzten in der Regel etwas verwirrt ist oder die Person Anzeichen einer Infektion aufweist und das Ergebnis negativ ist, was den Verdacht hervorruft, dass die Person den Test wiederholt.

3. Ein falsch positives Ergebnis ist das Ergebnis, wenn Bluttests unter den folgenden Bedingungen des Patienten durchgeführt wurden:

• Schwangerschaft
• wenn eine Person hormonelle Störungen hat;
• mit längerer Immunsuppression.

Wie kann man die Analyse in diesem Fall entschlüsseln? Ein falsch positives Ergebnis wird erzielt, wenn mindestens ein Protein nachgewiesen wird.

Aufgrund der Tatsache, dass das p24-Antigen sehr stark von individuellen Variationen abhängt, werden mit dieser Methode in der ersten Infektionsperiode zwischen 20% und 30% der Patienten nachgewiesen.

Über Indikatoren nach Forschung nach der Methode der Polymerase-Kettenreaktion

Mit dieser Methode wird HIV-RNA und -DNA fast unmittelbar nach der Infektion nachgewiesen. Die endgültige Diagnose wird jedoch nicht gestellt, sondern erfordert eine zwingende Bestätigung durch andere Methoden. „Helfen Sie mit, das Ergebnis der PCR zu entschlüsseln.“ - Oft ist eine solche Anfrage zu hören. Was wird in diesem Fall geschrieben, wenn ein Immunodeficiency-Virus entdeckt wird? Bei der Beantwortung des durch PCR erstellten Analyseergebnisses wird die Anzahl der RNA-Kopien in einem Milliliter Blut angegeben. Die nachstehende Tabelle zeigt das Ergebnis in Abhängigkeit von den quantitativen Merkmalen im Blut.

Was bedeutet es: HIV-Antikörper werden erkannt (nicht erkannt)

Einer der zuverlässigsten HIV-Tests ist ELISA (ELISA). Um das Vorhandensein von Immunodeficiency-Virus im Blut nachzuweisen, werden Antikörper getestet. Sollte ich mir Sorgen machen, wenn sie nicht gefunden werden? Was bedeutet eine positive IFA?

Was sagen HIV-Antikörper im Blut?

Wenn ein pathogenes Virus in den menschlichen Körper gelangt ist, beginnt das Immunsystem, Antikörper gegen HIV zu produzieren. Wenn solche Proteinverbindungen in der untersuchten Blutprobe gefunden werden, ist dies ein alarmierendes Signal. Die Chancen stehen gut, dass eine Person mit einem gefährlichen Virus infiziert ist. Das nachgewiesene p24-HIV-Antigen weist darauf hin, dass kürzlich eine Infektion mit dem Immunodeficiency-Virus aufgetreten ist. Antigen - organische Substanz. Seine Menge im Blut nimmt ab, da der Körper Antikörper produziert. Die Menge an Antikörpern pro Bluteinheit ermöglicht es uns, die Entwicklung der Krankheit vorherzusagen.

Ein weiteres wichtiges Merkmal ist die Viruslast (die Konzentration von Viruszellen in 1 ml Blutplasma). Je größer dieser Indikator ist, desto niedergedrückter ist das Immunsystem. Es kann die Reproduktion des Virus nicht verhindern.

Nach welcher Zeit treten HIV-Antikörper auf

Ein Enzymimmunoassay für HIV wird 3–4 Wochen nach einer möglichen Infektion durchgeführt. Dies früher zu tun ist bedeutungslos, weil sich die Antikörper noch nicht gebildet haben oder sie zu wenig sind. Wenn eine Infektion aufgetreten ist und keine HIV-Antikörper im Blut nachgewiesen werden, wird ein solcher Test als falsch negativ bezeichnet. Um eine endgültige Diagnose zu stellen, reicht der erste positive Test der HIV-Tests nicht aus. Der Garant für die Zuverlässigkeit der Forschung ist eine Überprüfung. Neue Diagnosen wurden nach 3 Monaten und 6 Monaten durchgeführt. Wenn alle Ergebnisse positiv sind, schreiben Sie zusätzliche Tests vor.

Die angegebenen Begriffe sind durchschnittlich. In jedem Fall sind die Begriffe unterschiedlich. Wenn der Anteil des infizierten Biomaterials, der in die innere Umgebung des Körpers gelangt ist, groß war, können sich die schützenden Proteine ​​- Antikörper - innerhalb einer Woche bilden. Dies ist bei der Transfusion von infiziertem Blut möglich. In 0,5% der Fälle kann HIV erst nach einem Jahr nachgewiesen werden. Dies geschieht, wenn die Anzahl der Viruszellen sehr gering ist.

Der Zeitpunkt, zu dem Antikörper im Körper einer infizierten Person erscheinen:

• in 90 - 95% der Fälle - 3 Monate nach der angeblichen Infektion;
• in 5–9% der Fälle nach 6 Monaten;
• in 0,5 - 1% der Fälle - zu einem späteren Zeitpunkt.

Standardindikatoren für das Vorhandensein von Antikörpern

Antikörper oder Immunglobuline werden gebildet, wenn fremde Viren und Bakterien sowie schädliche organische Verbindungen in den Körper gelangen. Jede Viruszelle hat ihren eigenen Antagonisten. Es werden einzigartige Paare gebildet: eine Fremdzelle + ein Immunglobulin. Nach dem Nachweis von Antikörpern im Körper erhalten die Ärzte Informationen über die Viren, die ihr Auftreten ausgelöst haben. Immunglobuline werden in 5 Gruppen unterteilt:

1. IgA - sind für die Immunabwehr gegen Erkältungen, Hautentzündungen, allgemeine Intoxikationen verantwortlich;
2. IgE - zur Bekämpfung von Parasiten;
3. IgM - Leibwächter. Sie „greifen“ virale Zellen an, sobald sie ins Blut gelangen;
4. IgD - während die Richtung ihrer Aktivität unbekannt ist. Solche Immunglobuline nicht mehr als 1%;
5. IgG - bietet Resistenz gegen den längeren Krankheitsverlauf, ist für den Schutz des Fötus im Mutterleib verantwortlich und ist die Hauptbarriere gegen Viren beim Neugeborenen. Ein Anstieg des IgG-Spiegels im Blut kann auf die Entwicklung von HIV hindeuten.

Normale IgG-Spiegel (Gigamol pro Liter)

Kinder von 7,4 bis 13,6 g / l

Erwachsene von 7,8 bis 18,5 g / l

Um Antikörper gegen HIV zu identifizieren, führen Sie eine quantitative Analyse durch. Ein negatives Ergebnis ist die Norm für einen gesunden Menschen. Ein positiver Test zeigt das Eindringen von Viruspartikeln in den Körper, gegen die Immunoglobuline synthetisiert werden.

Wenn in der Spalte "Antikörper" "+" steht, ist es zu früh, um zusammenzufassen, zusätzliche Forschung wird vorgeschrieben. Eine HIV-Infektion ist nicht immer die Ursache einer positiven Reaktion. Häufig sind andere Ursachen für Abnormalitäten erkennbar. Ursachen für falsch positive Reaktionen:

• In den ersten 18 Lebensmonaten sind die Immunglobuline des Kindes während der Schwangerschaft im Blut des Kindes enthalten.
• Autoimmunprozesse im Körper;
• das Vorhandensein eines Rheumafaktors;
• Medikamente.

Quantitative Analysen helfen, das Stadium der Erkrankung zu bestimmen. Wenn die Anzahl der Immunglobuline nicht signifikant ist, beginnt sich die Krankheit gerade zu entwickeln. Die Prognose ist in einem solchen Fall günstig. Eine hohe Konzentration an Schutzproteinen kann darauf hindeuten, dass HIV das Endstadium - AIDS - erreicht hat.

Zuteilung von HIV 1 und 2 Typen. Jeder von ihnen verursacht die Bildung bestimmter Antikörper. Die Bestimmung des Antikörpertyps hilft bei der qualitativen Analyse. Bei einer solchen Prüfung werden die Zahlen 1 und 2 angezeigt und die Daten werden vor jedem von ihnen ausgefüllt.

Wie erkennt man Antikörper gegen HIV?

Das Serum wird aus einer Portion venösen Blutes isoliert. Es wird auf fester Basis aufgetragen und mit Viruszellen kombiniert. Dann wird die Oberfläche mit speziellen Enzymen behandelt. Im Blut, wo Immunodeficiency-Viren ursprünglich vorhanden waren, werden nach dem Flushen Antikörper produziert.

Eine Person, die Blut für Antikörper spenden muss, sollte zwei Tage vor der Analyse fetthaltige und scharfe Speisen ablehnen und keine alkoholischen Getränke trinken. Es wird empfohlen, zwei Wochen lang keine antiviralen Medikamente mehr einzunehmen. Alle Medikamente sollten nur dann verwendet werden, wenn es absolut notwendig ist. Am Vorabend des Tests wird empfohlen, den psychischen und physischen Frieden zu beobachten. Die Analyse wurde morgens mit leerem Magen durchgeführt. Studien zum Vorhandensein von Antikörpern gelten als die zuverlässigsten bei der Diagnose einer HIV-Infektion. Der Fehler beträgt nicht mehr als 2%.

Indikationen für ELISA, einschließlich klinischer Anzeichen von HIV:

• anhaltende Rückfälle von Infektionskrankheiten;
• anhaltendes Fieber;
• hohe Infektionswahrscheinlichkeit (ungeschütztes Geschlecht oder Bluttransfusion von einer HIV-positiven Person);
• Krankenhausaufenthalt im Krankenhaus;
• Blutspende;
• Schwangerschaftsplanung und deren Verlauf;
• Verletzung durch eine Nadel oder einen anderen scharfen Gegenstand, der mit biologischem Material infiziert ist;
• vor der Operation

Anzeichen von HIV treten möglicherweise nicht sofort auf. In einigen Fällen macht sich die Krankheit nicht sehr lange (bis zu 10 Jahre) bemerkbar. Diese Tatsache behindert die rechtzeitige Diagnose und Behandlung. Um das humane Immundefizienzvirus rechtzeitig erkennen zu können, ist es notwendig, Tests bei geringstem Verdacht zu bestehen. Wenn die Diagnose bestätigt ist, werden alle Geschlechtspartner der Infizierten identifiziert. Sie sollten getestet werden und ihren HIV-Status bestimmen. Medizinisches Personal, das mit HIV-Patienten arbeitet, sollte routinemäßig überprüft werden.

HIV / AIDS-Test - Blut p24-Antigen

Serum-p24-Antigen ist normalerweise nicht vorhanden.

Das p24-Antigen ist ein HIV-Nukleotidwandprotein. Das Stadium der primären Manifestationen nach einer HIV-Infektion ist eine Folge des Beginns des Replikationsprozesses. Das p24-Antigen erscheint 2 Wochen nach der Infektion im Blut und kann durch ELISA zwischen 2 und 8 Wochen nachgewiesen werden. 2 Monate nach Beginn der Infektion verschwindet das p24-Antigen aus dem Blut. In der Zukunft wird im klinischen Verlauf der HIV-Infektion ein zweiter Anstieg des p24-Proteingehalts im Blut festgestellt. Es fällt auf die Zeit der Entstehung von AIDS.

Die bestehenden ELISA-Testsysteme zum Nachweis des p24-Antigens werden zur Früherkennung von HIV bei Blutspendern und Kindern eingesetzt, bestimmen die Prognose der Erkrankung und überwachen die Therapie. Das ELISA-Verfahren weist eine hohe analytische Empfindlichkeit auf, die es ermöglicht, HIV-1-p24-Antigen im Serum bei Konzentrationen von 5-10 pg / ml und weniger als 0,5 ng / ml HIV-2 und Spezifität nachzuweisen. Es ist jedoch zu beachten, dass der Gehalt an p24-Antigen im Blut individuellen Schwankungen unterliegt, sodass nur 20-30% der Patienten mit Hilfe dieser Studie in der frühen Zeit nach der Infektion identifiziert werden können.

Antikörper gegen das p24-Antigen der IgM- und IgG-Klassen im Blut treten ab der 2. Woche auf, erreichen für 2-4 Wochen einen Höchststand und bleiben für unterschiedliche Zeiten auf diesem Niveau - IgM-Antikörper für mehrere Monate, verschwinden innerhalb eines Jahres nach der Infektion und IgG-Antikörper können jahrelang bestehen bleiben.

Antikörper gegen HIV 1 und 2 und HIV Antigen 1 und 2 (HIV Ag / Ab Combo)

Antikörper gegen HIV 1 und 2 und HIV-Antigen 1 und 2 (HIV Ag / Ab Combo) - eine vollständige Beschreibung der Diagnose, Indikationen und Interpretation der Ergebnisse.

Antikörper gegen HIV 1 und 2 und HIV-Antigen 1 und 2 (HIV Ag / Ab Combo) sind Antikörper, die im Körper produziert werden, wenn sie mit dem humanen Immundefizienzvirus infiziert werden.

Das Human Immunodeficiency Virus (HIV) ist ein Mitglied der Retrovirus-Familie, es schädigt die Zellen des Immunsystems. Es gibt zwei Arten von Viren, HIV-1 ist häufiger, HIV-2 - hauptsächlich in afrikanischen Ländern.

HIV ist in menschliche Zellen eingebettet, die Viruspartikel vermehren sich und als Ergebnis erscheinen Antigene des Virus auf der Oberfläche der Zellen, zu denen die entsprechenden Antikörper produziert werden. Ihr Nachweis im Blut ermöglicht es Ihnen, eine HIV-Infektion zu diagnostizieren.

Antikörper gegen das Human Immunodeficiency Virus können drei bis sechs Wochen nach Eintritt des Virus in das Blut nachgewiesen werden. Ein starker Anstieg des Virus im Blut ist charakteristisch für das Stadium der primären Manifestationen. Diese Periode fällt auf die dritte bis sechste Woche nach der Infektion und wird als "Serokonversion" bezeichnet. Zu diesem Zeitpunkt kann die Infektion im Labor nachgewiesen werden und klinisch manifestiert sie sich entweder überhaupt nicht oder sie verläuft als Erkältungskrankheit mit einem Anstieg der Lymphknoten.

Nach 12 Wochen ab dem Zeitpunkt der Infektion werden bei fast allen Patienten Antikörper nachgewiesen. Im letzten Stadium einer Krankheit namens AIDS nimmt die Menge an Antikörpern ab.

Wie lange nach der Infektion eine HIV-Infektion erkannt wird, hängt vom Testsystem ab, das in einem bestimmten Labor verwendet wird. Kombinierte Testsysteme der vierten Generation erkennen die HIV-Infektion zwei Wochen nach dem Eintritt des Virus in den Blutkreislauf. Und Testsysteme der ersten Generation fanden HIV erst nach 6-12 Wochen.

Bei einer kombinierten Analyse ist es möglich, HIV-p24-Antigen nachzuweisen, das das Capsid des Virus ist. Sie wird 1 - 4 Wochen nach der Infektion im Blut vor dem Anstieg der Antikörperkonzentration im Blut (vor der "Serokonversion") bestimmt. Eine kombinierte Studie zeigt auch Antikörper gegen HIV-1, HIV-2, die zwei bis acht Wochen nach der Infektion zur Diagnose zur Verfügung stehen.

Vor der Serokonversion werden sowohl p24 als auch Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2 im Blut nachgewiesen. Nach der Serokonversion binden Antikörper p24-Antigen, so dass p24 nicht nachgewiesen wird, und Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2 werden nachgewiesen. Dann werden sowohl p24 als auch Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2 erneut im Blut nachgewiesen. Wenn eine HIV-infizierte Person an AIDS erkrankt, wird die Produktion von Antikörpern verletzt, sodass möglicherweise keine Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2 vorhanden sind.

Die Diagnose einer HIV-Infektion wird im Planungsstadium der Schwangerschaft und während der aktuellen Beobachtung einer schwangeren Frau durchgeführt, da die HIV-Infektion während der Schwangerschaft, während der Geburt und während der Stillzeit von der Frau auf den Fötus übertragen werden kann.

Indikationen für die HIV-Diagnose

Lässiger Sex.

Fieber ohne sachliche Gründe.

Geschwollene Lymphknoten in mehreren anatomischen Bereichen.

Vorbereitung auf die Studie

HIV-Tests werden in 3-4 Wochen ab dem Zeitpunkt der angeblichen Infektion durchgeführt. Wenn das Ergebnis negativ ist, wird die Analyse nach drei und sechs Monaten wiederholt.

Von der letzten Mahlzeit bis zur Blutentnahme sollte der Zeitraum mehr als acht Stunden betragen.

Nehmen Sie keine alkoholischen Getränke zu sich.

Für 1 Stunde vor der Entnahme kann das Blut zur Analyse nicht rauchen.

Es wird nicht empfohlen, unmittelbar nach Röntgen, Röntgen, Ultraschall und Physiotherapie Blut zu spenden.

Blut für die Forschung wird morgens auf nüchternen Magen genommen, sogar Tee oder Kaffee ist ausgeschlossen.

Es ist erlaubt, normales Wasser zu trinken.

20-30 Minuten vor der Studie wird dem Patienten die emotionale und körperliche Ruhe empfohlen.

Lernmaterial

Entschlüsselung der Ergebnisse der HIV-Diagnose

Die Analyse ist qualitativ. Wenn kein HIV-Antikörper nachgewiesen wird, wird die Antwort als "negativ" bezeichnet.

Wenn Antikörper gegen HIV nachgewiesen werden, wird die Analyse mit einer weiteren Testreihe wiederholt. Ein wiederholt positives Ergebnis erfordert eine Immunblot-Studie, den „Goldstandard“ der HIV-Diagnose.

Norm: negative Antwort.

1. Die Person ist nicht mit HIV infiziert.
2. Das Endstadium der HIV-Infektion (AIDS).
3. Seronegative Variante der HIV-Infektion (späte Bildung von Antikörpern gegen HIV).

Positive Antwort

1. Eine Person ist mit HIV infiziert.
2. Der Test ist nicht aussagekräftig bei Kindern unter anderthalb Jahren, die von HIV-infizierten Müttern geboren wurden.
3. Falsch positives Ergebnis bei Vorhandensein von Antikörpern im Blut gegen das Epstein-Barr-Virus, den Haupthistokompatibilitätskomplex Rheumafaktor.

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P24-Antigen, was ist das?

Die klinische und Labordiagnose einer HIV-Infektion umfasst drei Bereiche:

1. Feststellung der Tatsache der HIV-Infektion, Diagnose der HIV-Infektion.
2. Bestimmung des Stadiums des klinischen Verlaufs der Krankheit und Identifizierung von Sekundärerkrankungen.
3. Prognose des Fortschreitens des klinischen Verlaufs der Erkrankung, Laborüberwachung der Wirksamkeit der Behandlung und der Nebenwirkungen antiretroviraler Medikamente.

1. Feststellung der HIV-Infektion, Diagnose der HIV-Infektion

Zur Bestimmung der HIV-Infektion werden die folgenden spezifischen Indikatoren verwendet: Antikörper gegen HIV, HIV-Antigene, HIV-RNA und Provirus-DNA. Antikörper gegen HIV werden durch Enzymimmunoassay (ELISA) oder Immunblotting bestimmt, bei dem es sich im Wesentlichen um einen ELISA-Typ handelt. HIV-Antigene (Proteine) werden durch ELISA bestimmt. Mit molekulargenetischen Methoden der Polymerase-Kettenreaktion (PNR) und bDNA können HIV-RNA und Provirus-DNA bestimmt werden. Die Verwendung eines zusätzlichen Verfahrens zur Hybridisierung von Nukleinsäuren mit spezifischen DNA-Sonden ermöglicht es, die Spezifität von DNA-Sequenzen zu überprüfen, die während der PCR erhalten werden. Die Sensitivität der PCR ist der Nachweis viraler Gene in einer von fünftausend Zellen [27].

Während der Erstinfektion wird die folgende Dynamik von HIV-Markern im Blut von Infizierten beobachtet. Im ersten Monat kommt es durch die Aktivierung des replikativen Prozesses zu einem starken Anstieg der Viruslast (Plasma-HIV-RNA-Gehalt). Durch die Verbreitung des Virus und die Masseninfektion von Zielzellen im Blut und in den Lymphknoten wird es möglich, die provirale DNA zu bestimmen. Von primärem diagnostischem Wert ist der Nachweis der DNA des Provirus, das in das Genom der Zielzelle integriert ist.

Die Viruslast spiegelt die Intensität des Replikationsprozesses in infizierten Zellen wider. Während des Zeitraums der Primärinfektion unterscheidet sich die Höhe der Viruslast, wenn sie mit verschiedenen HIV-Subtypen infiziert wird, die Dynamik ihrer Änderungen ist jedoch in etwa gleich. Wenn also mit dem Subtyp B infiziert wird, wenn die Viruslast im ersten Monat nach der Infektion 700 Kopien / ml beträgt, so nimmt der zweite Monat im zweiten Monat auf 600 ab, im dritten - auf 100, im vierten - auf 50 Kopien / ml. Eine solche Dynamik wird vor dem Hintergrund eines Anstiegs des Blutgehaltes spezifischer HIV-Antikörper beobachtet. Der Gehalt an proviraler DNA in mononukleären Blutzellen von HIV-infizierten Personen ist in den ersten 6 Monaten durch eine relative Konstanz gekennzeichnet, wobei einige Subtypen geringfügige Schwankungen aufweisen. Daher sind die RNA- und DNA-Ladungen nicht identisch.

In der Inkubationsphase tritt seit einiger Zeit die Bildung spezifischer Antikörper gegen HIV nicht in einer ausreichenden Menge auf, um die vorhandenen Labormethoden zu bestimmen. Vor der Registrierung von Antikörpern werden das Nef-Protein im Blut, das den Replikationsprozess unterdrückt, und das Strukturprotein p24 für sehr kurze Zeit im Blut beobachtet. Das p24-Antigen kann im Blut durch die Methode der Immunenzymanalyse innerhalb von 1-2 Pedal nach der Infektion nachgewiesen und vor der 8. Woche bestimmt werden, dann nimmt sein Gehalt stark ab. Ferner wird im klinischen Verlauf der HIV-Infektion ein zweiter Anstieg des Blutgehalts des p24-Proteins festgestellt. Es fällt auf die Zeit der Entstehung von AIDS. Das Verschwinden freier (nicht Antikörper-gebundener) p24-Kernproteine ​​im Blut und das Auftreten spezifischer Antikörper gegen HIV-Proteine ​​markieren den Beginn der Serokonversion (Abb. 9.6).

Virämie und Antigenämie verursachen die Bildung spezifischer IgM-Klasse-Antikörper (Anti-p24, Anti-gp41, Anti-gp120, Anti-gp160). Freie Antikörper der IgM- und IgG-Klassen gegen das p24-Protein können ab der 2. Woche auftreten, ihr Gehalt steigt während 2 bis 4 Wochen an und erreicht ein bestimmtes Niveau, das über Monate (IgM) und Jahre (IgG) aufrechterhalten wird (Abb. 9.7).

Das Auftreten einer vollständigen Serokonversion, wenn ein hohes Maß an spezifischen IgG-Antikörpern gegen die Strukturproteine ​​von HIV p24, gp41, gp120, gp160 im peripheren Blut nachgewiesen wird, erleichtert die Diagnose einer HIV-Infektion erheblich. HIV-Antikörper treten bei 90-95% der Infizierten innerhalb von 3 Monaten nach der Infektion auf, bei 5-9% (in der Zeit von 3 bis 6 Monaten ab dem Zeitpunkt der Infektion) und in 0,5-1% in den späteren Perioden.

Trotz der Tatsache, dass Antikörper gegen HIV an letzter Stelle auftauchen, war der bisher wichtigste Indikator für die Labordiagnostik der Nachweis spezifischer Antikörper durch ELISA und Immunoblotting.

Die in Tabelle 9.2 [zeigen] und 9.3 [zeigen] dargestellten Daten zeigen eindeutig die hohe Empfindlichkeit moderner Enzymimmunoassay-Testsysteme für den Nachweis von Antikörpern gegen HIV, die der Empfindlichkeit des Immunblots überlegen ist. In einigen Fällen, wenn ein primär positives Ergebnis bei ELISA erhalten wird, ist es möglich, das Immunblotting erst nach 2-3 Wochen zu bestätigen.

Bei der Untersuchung von Patienten mit HIV-Infektion (HIV-infiziert) mit den Immunoblot-Testsystemen führender Unternehmen der Welt werden in allen Fällen Antikörper gegen gp160 und p24 / 25 nachgewiesen, 38,8-93,3% der Fälle werden mit anderen Proteinen nachgewiesen (Tabelle. 9.4 [Zeigen]).

Schwierigkeiten beim Nachweis von Antikörpern bei Patienten mit einer HIV-Infektion können in Zeiten massiver Virämie und Antigenämie auftreten, wenn die spezifischen Antikörper im Blut mit Viruspartikeln assoziiert sind und der Replikationsprozess der Produktion neuer antiviraler Antikörper voraus ist. Diese Situation kann während des Infektionsprozesses auftreten und verschwinden [15].

Bei Patienten mit zunächst geschwächtem Immunsystem treten Virämie und Antigenämie früher auf und bleiben bis zum Auftreten der Krankheit hoch. Bei diesen Patienten gibt es einen geringen Gehalt an freien Antikörpern gegen HIV aus zwei Gründen - unzureichende Produktion von Antikörpern durch B-Lymphozyten und Antikörperbindung durch Virionen und lösliche HIV-Proteine. Daher sind zur Bestimmung der Infektion Testsysteme mit erhöhter Empfindlichkeit oder Modifikation der Analysemethoden erforderlich, die das Stadium der Freisetzung von Antikörpern vorsehen von Immunkomplexen [7].

Am häufigsten tritt eine Abnahme des Gehalts an Antikörpern gegen HIV aus diesen Gründen im Endstadium auf, wenn Antikörper gegen HIV im Serum nicht unter Verwendung von Enzym-Immunoassay-Methoden oder Immunblotting (Western Blot) eingefangen werden können. Neben dem Auftreten spezifischer Antikörper gegen HIV ist die Immunantwort in den ersten 4 Monaten durch eine Abnahme des Blutgehalts von infiziertem CD4 + - und einen Anstieg der CD8 + -Zellen gekennzeichnet. Ferner stabilisiert sich der Inhalt der Zellen, die die CD4- und CD8-Rezeptoren tragen, und bleibt für einige Zeit unverändert. Die Erhöhung des Gehalts an CD8-Lymphozyten ist da eine Schutzreaktion Zellabhängige Zytotoxizität wird durch CD8 + -Lymphozyten erreicht, die darauf abzielen, HPV-infizierte Zellen zu zerstören. Zytotoxische Lymphozyten (CTLs) sprechen zunächst auf das Regulationsprotein Nef-Virus an, das während der ersten Monate eine wichtige Rolle bei der Verringerung der Viruslast (RNA) im Plasma einer HIV-infizierten Person spielt. Dann die Antwort der CTL und auf andere, einschließlich strukturelle HIV-Proteine, die 12 Monate nach der Infektion zu einer zytotoxischen Wirkung führen, steigt signifikant.

Labordiagnostik einer HIV-Infektion

Angesichts der oben genannten Dynamik bestimmter Marker einer HIV-Infektion in der Praxis ist es ratsam, die folgende Labordiagnose bei Erwachsenen einzuhalten (Abb. 9.8-9.10).

Die Diagramme spiegeln die drei Hauptstadien der primären Labordiagnose einer HIV-Infektion wider:

1. Screening.
2. Referenz
3. Experte

Der Bedarf an mehreren Stufen der Labordiagnostik beruht hauptsächlich auf wirtschaftlichen Überlegungen. Beispielsweise betragen die Kosten für die Durchführung eines Expertenforschungsverfahrens mit Immunoblotting mit inländischen Testsystemen bis zu 40 US-Dollar, das Screening (durch ELISA) beträgt etwa 0,2, d. H. Das Verhältnis beträgt 1: 200.

Im ersten Stadium (Abb. 9.8) werden die getesteten Antikörper mit einem Enzymimmunoassay-System zum Nachweis von Antikörpern gegen beide Virustypen - HIV-1 und HIV-2 - nachgewiesen.

Herstellerunternehmen in den vorgeschlagenen Testsystemen verwenden virale Lysate, rekombinante Proteine ​​und synthetische Peptide als antigene Basen. Jeder dieser Träger von antigenen Determinanten von HIV hat seine eigenen Vor- und Nachteile. Bei der Auswahl von Testsystemen mit annähernd gleichen Kosten sollten daher Sätze mit der höchsten Empfindlichkeit (vorzugsweise 100%) bevorzugt werden. Bei den Testsystemen mit gleichen Kosten und Sensitivität ist es ratsam, sich auf diejenigen mit maximaler Spezifität zu konzentrieren.

Auf Basis des Viruslysats wurden die ersten Testsysteme zur Labordiagnostik einer HIV-Infektion geschaffen. In den achtziger Jahren waren solche Testsysteme durch eine Empfindlichkeit von weniger als 100% und eine geringe Spezifität gekennzeichnet, die sich in einer großen Anzahl (bis zu 60%) falsch-positiver Ergebnisse äußerte.

Wenn ein Virion in einer Lymphozytenkultur gebildet wird, wird seine Hülle aus der äußeren Membran gebildet und enthält daher Antigene des Haupthistokompatibilitätskomplexes der Klassen I und II. Dieser Umstand führt zu falsch positiven Reaktionen, falls im Blut von Patienten Antikörper gegen Histokompatibilitätsalloantigene vorhanden sind.

Um ein Virus zu erhalten, wurde später vorgeschlagen, eine Kultur von Makrophagen zu verwenden, bei der Viruspartikel vorwiegend intrazellulär durch Knospung nicht aus der äußeren Zellmembran, sondern aus den Membranen des endoplasmatischen Retikulums gebildet werden. Diese Technologie hat die Anzahl der falsch positiven Ergebnisse reduziert.

Eines der besten hinsichtlich der wichtigsten Merkmale - Sensitivität und Spezifität - Enzymimmunoassay-Testsysteme, die eine Kombination aus gereinigtem Viruslysat und synthetischen Peptiden umfassen, sind die am meisten Antigen-signifikanten Teile von Virusproteinen oder rekombinanten Proteinen.

Die Empfindlichkeit des Testsystems hängt auch von den Eigenschaften der anderen Komponenten des Kits ab. Testsysteme, die Konjugate verwenden, die Antikörper nicht nur der IgG-Klasse, sondern auch von IgM und IgA erkennen, ermöglichen somit den Nachweis der früheren Phase der Serokonversion. Es scheint vielversprechend zu sein, Testsysteme zu verwenden, mit denen gleichzeitig sowohl antivirale Antikörper als auch das p24-Antigen bestimmt werden können, was die Labordiagnose einer HIV-Infektion noch früher macht.

Das primäre positive Ergebnis muss erneut geprüft werden, indem die Probe im selben Testsystem erneut geprüft wird, vorzugsweise jedoch in einer anderen Serie und einem anderen Labortechniker. Wird während der zweiten Studie ein negatives Ergebnis erzielt, wird die Studie zum dritten Mal durchgeführt.

Nach Bestätigung eines positiven Ergebnisses ist es ratsam, Blut erneut zu entnehmen und auf Antikörper gegen HIV als primären Antikörper zu testen. Durch wiederholtes Entnehmen von Blut können Fehler vermieden werden, die auf die Ungenauigkeit der Kennzeichnung der Reagenzgläser und das Ausfüllen der Richtungsangaben zurückzuführen sind.

Seropositiv Im Screening-Stadium wird das Serum zu Referenzstudien geschickt, die mit zwei oder drei hochspezifischen ELISA-Testsystemen durchgeführt werden. Bei zwei positiven Ergebnissen wird eine Expertenstudie unter Verwendung von Immunblotting durchgeführt.

Die Verwendung von Referenzenzym-Immunoassay-Testsystemen, mit denen spezifische Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2 unterschieden werden können, erleichtert die weitere Arbeit und ermöglicht Ihnen die sofortige Untersuchung einer positiven Probe im Expertenstadium mithilfe eines geeigneten Immunoblotts (HIV-1 oder HIV-2)..

Das Laborgutachten zur HIV-Infektion wird nur aufgrund eines positiven Ergebnisses des Immunblots (Western Blot) abgegeben. Bei der Durchführung der Expertendiagnostik ist es notwendig, die Nomenklatur der HIV-Gene und Genprodukte zu verwenden, die 1990 von einer Expertengruppe der WHO vorgeschlagen wurde (Tabelle 9.5).

Die Spezifität der Banden auf dem Immunoblot sollte sehr sorgfältig und sorgfältig beurteilt werden, wobei die Ergebnisse von Tests von Kontrollseren (positiv und negativ), die parallel zur Untersuchung experimenteller Proben durchgeführt werden, und eine Immunoblotprobe mit der Bezeichnung von HIV-Proteinen (vom Hersteller dem Testsystem beigefügt) verwendet werden. Die Interpretation der erzielten Ergebnisse sollte gemäß den Anweisungen des Testsystems erfolgen. In der Regel ist das Kriterium der Positivität das obligatorische Vorhandensein von Antikörpern gegen zwei Proteine ​​(Vorläufer, externe oder Transmembran), die vom env-Gen kodiert werden, und das mögliche Vorhandensein von Antikörpern gegen die Produkte zweier anderer struktureller HIV-Gene - gag und pol (Tabelle 9.6).

Im Falle eines zweifelhaften Ergebnisses ist es notwendig, die Liste der Empfehlungen zur abschließenden Klärung der Ergebnisse des Immunblots zu verwenden (Tabelle 9.7).

Gemäß den Empfehlungen des russischen wissenschaftlichen und methodologischen Zentrums für die Prävention und Bekämpfung von AIDS wird ein positives Ergebnis betrachtet, wenn Antikörper gegen mindestens eines der Proteine ​​gp41, gp120, gp160 in Kombination mit Antikörpern gegen andere spezifische Proteine ​​von HIV-1 oder ohne diese vorliegen [10]. Diese Empfehlungen basieren auf Erfahrungen mit den Seren von Kindern aus nosokomialen Herden, die oft Antikörper gegen nur eines der Hüllproteine ​​des Virus identifizierten.

Der Hauptteil der Patienten, die zunächst im ELISA seropositiv untersucht wurden, bezieht sich auf die persistierende generalisierte Lymphadenopathie (PHL) oder die asymptomatische Phase. Daher wird auf dem Immunoblot (einem Nitrocellulosestreifen, auf dem HIV-Proteine ​​immobilisiert sind) normalerweise die folgende Kombination von Antikörpern gegen HIV-1 bestimmt: Antikörper gegen die Hüllproteine ​​gp160, gp120 und gp41, die durch das env-Gen kodiert werden, in Kombination mit Antikörpern gegen die Kernproteine ​​p24 (Protein) durch das gag-Gen kodiertes Nukleokapsid) und p31 / 34 (Endonuklease, kodiert vom pol-Gen).

Positive Reaktionen nur mit gag- und / oder pol-Proteinen können in einer frühen Phase der Serokonversion auftreten und weisen auch auf eine durch HIV-2 oder eine nichtspezifische Reaktion verursachte Infektion hin.

Im Falle eines zweifelhaften Ergebnisses können verschiedene methodische Techniken angewendet werden, die es ermöglichen, die Tatsache einer HIV-Infektion aufzuklären.

Abhängig von den technischen Fähigkeiten (Verfügbarkeit von Diagnosekits und Reagenzien, Ausrüstung mit Spezialausrüstung und Schulung des Personals) führt das Expertenlabor zusätzliche Diagnosestudien durch (Abb.9.10).

In einigen Fällen ist es ratsam, molekulargenetische Methoden zu verwenden, um die genetischen Sequenzen von HIV im Serum, in Blutlymphozyten oder in punktierten Lymphknoten zu bestimmen. Das Testen der Spezifität von DNA-Sequenzen, die durch PCR erhalten werden, kann durch Hybridisierung von Nukleinsäuren mit spezifischen DNA-Sonden durchgeführt werden.

Methoden der Radioimmunfällung (RIP) und der indirekten Immunfluoreszenz (IFL) können auch zur abschließenden Verifizierung von Seren mit zweifelhaften Ergebnissen beim Immunoblotting eingesetzt werden [14].

Der Nachweis von HIV-RNA im Plasma mittels einer qualitativen oder quantitativen Methode ist für die Diagnose einer HIV-Infektion nicht wichtig. Ein solches Ergebnis sollte durch Standardmethoden wie Immunblotting 2-4 Monate nach der ersten zweifelhaften oder negativen Reaktion bestätigt werden.

Die Isolierung von HIV in Zellkultur ist die ultimative Wahrheit. Das Verfahren ist jedoch kompliziert, teuer und wird nur in speziell ausgestatteten Forschungslabors durchgeführt.

Der Gehalt an CD4 + -Zellen im Blut ist ein unspezifischer Indikator. In umstrittenen Fällen (ELISA "+", Immunoblot "-", Vorhandensein klinischer Anzeichen einer HIV-Infektion / AIDS) kann er jedoch als Leitfaden für eine Expertenentscheidung verwendet werden. Wenn das Labor nur Immunblotting durchführen kann, sollten Sie den Empfehlungen in der Tabelle folgen. 9.7 und in fig. 9,9.

Personen, deren fachkundige Untersuchung des Serums zweifelhafte (unbestimmte) Ergebnisse erhielt, mit Ausnahme des Nachweises von Antikörpern gegen p17 (HIV-1) oder nur p16 (HIV-2), sollten für 6 Monate (nach 3 Monaten) erneut getestet werden. Bei einer echten HIV-Infektion wird nach 3-6 Monaten ein "positiver" Trend im Antikörperspektrum beobachtet - die zusätzliche Bildung von Antikörpern gegen andere Proteine ​​des Virus. Eine falsche Reaktion zeichnet sich durch das lang anhaltende zweifelhafte Bild des Immunblots oder durch das Verschwinden verdächtiger Banden aus. Wenn nach dem angegebenen Zeitraum die Ergebnisse des wiederholten Immunblots negativ sind oder zweifelhaft bleiben, kann die Person bei Fehlen von Risikofaktoren, klinischen Symptomen oder anderen mit einer HIV-Infektion assoziierten Faktoren als seronegativ für Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2 angesehen werden.

Falsch positive Ergebnisse aufgrund des Blutgehalts von Patienten mit Antikörpern gegen Histokompatibilitätsalloantigene, die einen Teil der HIV-Hülle bilden, manifestieren sich auf dem Immunoblot als Banden auf der Ebene von gp41 und gp31. Die Ursachen anderer unspezifischer Reaktionen (zum Beispiel auf p24, die häufig bei Personen mit Autoimmunprozessen auftreten) sind noch nicht geklärt.

Durch die Verbesserung der Produktionstechnologie von Immunofermental-Testsystemen konnte eine hohe Empfindlichkeit erreicht werden - bis zu 99,99%, während die Empfindlichkeit der Immunblot-Methode 97% beträgt. Daher kann ein negatives Ergebnis beim Immunoblotting mit positiven Ergebnissen beim ELISA auf eine anfängliche Serokonversionsperiode hinweisen, die durch einen geringen Spiegel an spezifischen Antikörpern gekennzeichnet ist. Daher ist es notwendig, die Studie nach 1,5 bis 2 Monaten zu wiederholen, d. H. Nach der Zeit, die erforderlich ist, um die Serokonversion abzuschließen, um im Blut eine Konzentration an spezifischen Antikörpern zu erhalten, die ausreicht, um durch Immunoblotting nachzuweisen.

Ein positives Ergebnis (Ergebnisse) der Studie in der Referenz- oder Einzeltestphase der Labordiagnose einer HIV-Infektion, dh ein positives Ergebnis in einem Enzym-Immunoassay-Testsystem, das nicht durch Expertenmethoden bestätigt wurde, wird als Anwesenheit von Kreuzreaktionsantikörpern im Blut interpretiert. Unter Kreuzreaktion versteht man die Antikörperbindung nichtspezifischer Stellen an HIV-Proteinen oder Peptiden, die als antigene Basis in dem Testsystem verwendet werden, in dem ein positives Ergebnis erhalten wird.

Bei Fehlen von Immunschwäche und klinischen Anzeichen einer HIV-Infektion gelten diese Personen als seronegativ für HIV-Antikörper und sollten aus dem Register gestrichen werden.

Die endgültige Diagnose einer HIV-Infektion wird nur auf der Grundlage aller klinischen, epidemiologischen und Labordaten gestellt. Nur der behandelnde Arzt hat das Recht, den Patienten über die Diagnose einer HIV-Infektion zu informieren.

Die Hauptmethode zur Bestätigung der (fachkundigen) Labordiagnose einer HIV-Infektion ist das Immunoblotting. Aufgrund ihrer im Vergleich zu ELISA geringeren Empfindlichkeit wurde jedoch vorgeschlagen, eine Kombination mehrerer Testsysteme für die endgültige Bestimmung der Anwesenheit spezifischer Antikörper gegen HIV zu verwenden. Zum Beispiel haben G. van der Groen et al. [30] schlug eine alternative Methode für das Immunoblotting vor, um die positiven Ergebnisse der Screeningphase der Labordiagnostik einer HIV-Infektion zu überprüfen. Parallel dazu wird in drei Testsystemen Material untersucht, das auf verschiedenen Methoden zum Nachweis spezifischer HIV-Antikörper (mehrere ELISA-Optionen, Agglutinationsreaktion) unter Verwendung von Antigenen unterschiedlicher Art basiert. Die Autoren konnten solche Kombinationen von Testsystemen auswählen, deren Verwendung eine 100% ige Sensitivität und Spezifität im Vergleich zu den beim Immunblotting erzielten Ergebnissen liefert.

Die Billigkeit dieser Methode der Expertendiagnostik ist zweifellos ein Vorteil, aber das Fehlen von Informationen darüber, welche Proteine ​​des Virus spezifisch Antikörper im Blut des Patienten enthalten, erlaubt es nicht, die Spezifität der Reaktion in jedem einzelnen Fall zu beurteilen und auch Veränderungen im Antikörperspektrum in einem frühen Stadium der Serokonversion zu verfolgen.

Die Labordiagnose einer HIV-Infektion bei Kindern, die von HIV-infizierten Müttern geboren werden, hat ihre eigenen Merkmale [24]. Ab dem Zeitpunkt der Geburt (bis zu 15 Monate) können mütterliche Antikörper gegen HIV im Blut solcher Kinder zirkulieren. Nur Immunglobuline der IgG-Klasse durchdringen die Plazentaschranke, weshalb der Nachweis von HPM-spezifischen IgM- und IgA-Klassen, die für HPV spezifisch sind, die Bestätigung der Infektion ermöglicht, ein negatives Ergebnis jedoch keine Abwesenheit von HIV anzeigen kann.

Bei Kindern unter einem Monat ist die HPV-Replikation noch nicht verfügbar, und PCR ist die einzige Methode zur Verifizierung. Die Bestimmung von p24-Antigen bei Kindern, die älter als 1 Monat sind, ist ebenfalls eine Bestätigungsmethode.

Das Fehlen von Antikörpern gegen HIV bei Neugeborenen bedeutet nicht, dass das Virus nicht in die Plazentaschranke eingedrungen ist. In jedem Fall werden Kinder von HIV-infizierten Müttern 36 Monate ab Geburt einer Labor- und diagnostischen Untersuchung und Beobachtung unterzogen [10].

Die Ergebnisse von Labortests für Marker einer HIV-Infektion erfordern eine sorgfältige Interpretation und sollten nur in Verbindung mit Daten aus epidemiologischen und klinischen Erhebungen betrachtet werden. Andererseits ist zu beachten, dass trotz der hohen Sensitivität moderner Methoden die negativen Ergebnisse der Forschung das Vorhandensein einer HIV-Infektion nicht vollständig ausschließen können. Daher kann ein negatives Ergebnis der Studie, beispielsweise unter Verwendung der Immunoblot-Methode, nur als Abwesenheit spezifischer Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2 formuliert werden.

Diagnose einer HIV-Infektion bei seronegativen Patienten

Die Qualität der Testsysteme, die in der Labordiagnose einer HIV-Infektion eingesetzt werden, verbessert sich jedes Jahr, ihre Empfindlichkeit steigt. Die hohe Variabilität von HIV kann jedoch zur Entstehung neuer Typen führen, gegen die Antikörper möglicherweise von bestehenden Testsystemen nicht erkannt werden. Darüber hinaus gibt es Fälle einer atypischen humoralen Reaktion des Immunsystems des Wirts auf ein Virus. So berichtete L. Montagnier im Jahr 1996 über zwei AIDS-Patienten, die in den letzten Jahren keine spezifischen Antikörper im Blut nachgewiesen hatten. Die Diagnose wurde aufgrund klinischer Daten gestellt und im Labor nur mit der Freisetzung von HPV-1 in Zellkultur bestätigt. In solchen Fällen müssen die Empfehlungen der WHO herangezogen werden, nach denen die klinische Diagnose einer HIV-Infektion bei Erwachsenen und Kindern in Gegenwart einer der 12 AIDS-Indikator-Erkrankungen möglich ist:

1. Candidiasis der Speiseröhre, Luftröhre, Bronchien, Lungen;
2. extrapulmonale Kryptokokkose;
3. Kryptosporidiose mit Durchfall für mehr als einen Monat;
4. Zytomegalievirus-Schädigung eines Organs (außer und zusätzlich zu Leber, Milz und Lymphknoten bei einem Patienten, der älter als 1 Monat ist):
5. Infektion, die durch das Herpes-simplex-Virus verursacht wird, das bei einem Patienten, der älter als 1 Monat ist, länger als 1 Monat anhält;
6. Gehirnlymphom bei einem Patienten unter 60 Jahren;
7. lymphozytäre interstitielle Pneumonie bei einem Kind unter 13 Jahren;
8. Antiinfektion durch Bakterien der Gruppe Micobacterium avium intracellulare oder M. Kansassii;
9. Lungenentzündung;
10. progressive multifokale Leuko-Enzephalopathie;
11. Toxoplasmose des Zentralnervensystems bei Patienten älter als 1 Monat.

Das Vorhandensein einer dieser Krankheiten ermöglicht es Ihnen, die HIV-Infektion zu diagnostizieren, ohne die Möglichkeit zur Durchführung von Blutuntersuchungen im Labor auf Vorhandensein von HIV-Antikörpern oder selbst wenn Sie ein seronegatives Ergebnis erhalten.

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Quelle: Medizinische Labordiagnostik, Programme und Algorithmen. Ed. prof. Karpischenko AI, St. Petersburg, Intermedika, 2001